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大鼠三叉神经节离体培养可用于血管性头痛发病机制和药物治疗的靶点研究_临床医学论文 大鼠三叉神经节离体培养可用于血管性头痛发病机制和药物治疗的靶点研究_临床医学论文 作者：罗国刚，雷莉，吕社民，樊文静，徐仓宝 【摘要】 　　目的 颈动脉血降钙素基因相关肽水平升高是引发血管性头痛发作的重要原因之一，本研究探讨血管性头痛的发生机制和药物作用靶点的理想体外模型。方法 SD大鼠三叉神经节在无血清DMEM培养液中离体培养12、24、48h后免疫组化方法比较降钙素基因相关肽(CGRP)阳性细胞数表达水平，实时定量PCR法(real timePCR)确定CGRP表达水平的变化。结果 大鼠三叉神经节离体培养24h后CGRP的免疫阳性表达细胞数明显增高，CGRP表达水平也较新鲜组明显增高(P均lt;0.05)。结论 大鼠三叉神经节离体培养后能精确模拟体内血管性头痛发作期CGRP的变化，是研究血管性头痛发生机制和开发药物作用靶点的理想体外模型。 【关键词】 三叉神经节；离体培养；降钙素基因相关肽；体外模型 　　ABSTRACT: Objective To explore an ideal model for primary vascular headache in studying pathogenesis and new medication therapeutic target in vitro. Methods Trigeminal ganglion (TG) of SD rats was isolated and cultured in serumfree DMEM medium for 12h, 24h and 48h. Then the calcitonin generelated peptide (CGRP) positive stained cells were detected by using immunohistochemistry staining， and reald cell number and upregulated strikingly CGRPmRNA expression compared with fresh TG (0.05). Conclusion The TG after explant culture with serumfree medium exactly simulates the pivotal change in primary vascular headache attack, which always manifests the increased release of neuropeptides, such as CGRP. Therefore, explant culture of rat TG is an ideal model in vitro for studying pathogenesis and new therapeutic target primary vascular headache. 　　KEY WORDS: trigeminal ganglion; explant culture; calcitonin generelated peptide; in vitro model 　　血管性头痛人群发病率约16%～20%[1]，在全球造成的经济负担重于脑血管病。血管性头痛急性发作时三叉神经血管系统激活，三叉神经节逆向释放以降钙素基因相关肽(calcitonin gene为代表的血管活性肽类物质明显增多，当 CGRP释放降至基线水平时头痛缓解[2。未来10年治疗偏头痛最有效、最安全、最持久的药物将是CGRP拮抗剂[5。目前，研究血管性头痛发病机制的动物模型有血管源性机制模型、三叉神经节刺激模型、硬脑膜神经源性炎症模型、皮层扩布性抑制(CSD)模型、CACNA1A、ATP1A2和SCN1基因相关模型等[7。但是，以上动物模型都不能精确模拟出头痛急性发作时CGRP的变化规律，也不利于开发药物作用的新靶点。本研究把大鼠三叉神经节离体后在无血清的DMEM培养液中培养一定时间观察以CGRP为代表的血管活性肽类物质的变化规律，旨在寻求一种血管性头痛发生机制和开发药物作用新靶点理想的体外研究模型。 　　1 材料与方法 　　1.1 大鼠三叉神经节离体培养模型的建立 　　成年雄性Sprague大鼠，SPF级，体重250～300g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。戊巴比妥钠腹腔内注射(40mg/kg，必要时追加剂量)麻醉后在750mL/L酒精中浸泡消毒3min，断头处死用止血钳沿枕骨大孔处逐层剥开颅骨、颞骨，刮掉大脑小脑暴露三叉神经，轻轻剪断三个感觉根取出神经节，在冷