姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响_临床医学论文.docVIP

姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响_临床医学论文 姜黄素衍生物对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响_临床医学论文 作者：许娇红， 张志强， 刘洋， 许建华 【摘要】 　　目的 研究姜黄素（Cur）衍生物对K562细胞酪氨酸酶激活性的影响，从中筛选酪氨酸激酶（PTKs）抑制剂。 方法 以PGT[聚谷氨酸钠∶酪氨酸 (4∶1)］为激酶反应底物包被96孔酶标板，以磷酸化酪氨酸特异性单克隆抗体为第一抗体，应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测反应体系中加入的K562细胞裂解液PTKs对反应底物PGT的酪氨酸残基磷酸化的程度，以此测定K562细胞裂解液中的PTKs活性。在此反应体系中加入不同浓度的Cur衍生物，观察对PTKs活性的影响。 结果 对Cur衍生物进行筛选，得到4种PTKs抑制剂，分别为Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824。4个Cur衍生物对PTKs活性的抑制均明显强于Cur，且呈量效、时效关系。 结论 Cur衍生物FM0815、FM0817、FM0822及FM0824具有显著的PTKs活性抑制作用。 【关键词】 姜黄素； K562细胞； 蛋白酪氨酸激酶类； 酶联免疫吸附测定 　　ABSTRACT: Objective To study the effect of curcumin derivatives on activity of protein tyrosine kinase (PTK) in K562 cells and to screen potential PTK inhibitors. Methods Poly Glu∶Tyr (4∶1) coated on the 96monoclonal antibody as the first antibody to determine the level of PGT tyrosine residue phosphorylation which reflected the activity of protein tyrosine kinase in K562 cell lysate. Curcumin derivatives of different concentrations were screened and their effects on the activity of PTK were studied. Results Curcumin derivatives were screened and 4 potential inhibitors were obtained, namely, FM0815, FM0817, FM0822 and FM0824. All of them had much higher PTK inhibition activity than curcumin in a dose and timedependent manner. Conclusion The activity of PTK is inhibited apparently by curcumin derivatives FM0815, FM0817, FM0822 and FM0824. 　　KEY WORDS: CURCUMIN; K562 cells; protein 　　酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases，PTKs)是一种很重要的酶类, 能催化ATP的γ磷酸基转移到许多重要蛋白质的酪氨酸残基上, 使酪氨酸磷酸化而激活许多重要的信号通路。在许多肿瘤患者，PTK的表达水平还与患者的预后密切相关[1。p210Bcr是慢性粒细胞白血病（chronic myelogeous leukemia，CML）的特征性蛋白[4，具有异常活跃的PTKs活性，因此下调p210Bcr及其酪氨酸磷酸化水平，理论上具有抗CML的作用。针对这一途径开发新的抗CML药物已成为当前抗癌药研究的热点，并且取得了一些重要进展[6]。2001年，首个小分子Bcr酪氨酸激酶抑制剂Gleevec上市用于CML的治疗, 是分子靶向抗肿瘤药物发展的里程碑[7]。 　　姜黄素(Curcumin，Cur)具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种药理作用，特别是抗肿瘤作用备受关注[8]。本课题组前期研究发现，Cur对K562细胞的抑制作用,与其抑制K562细胞p210Bcr含量及其PTK活性有关，提示Cur对CML的治疗可能具有潜在作用[9。但是Cur在体内不稳定，限制了其临床应用，为此，课题组对Cur进行结构修饰，合成系列Cur的衍生物，希望能够克服Cur的缺点。本研究应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对合成的Cur衍生物抑制PTK的活性