豫南地区母牛子宫内膜炎致病菌的分离鉴定.pdfVIP

∗ （河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002 ） 摘 要：本研究以豫南地区部分牛场的繁殖母牛为对象，随机抽取 60 头患子宫内膜炎的母牛，取其子 宫内容物通过需氧和厌氧培养及生化试验进行细菌分离、鉴定。结果显示豫南地区母牛子宫内膜炎的主要 病原菌为葡萄球菌、大肠杆菌、化脓放线菌。病原菌大体分布为金色葡萄球菌 15.86%；表皮葡萄球菌11.01%； 大肠杆菌 18.50%；化脓放线菌 14.98%；克雷伯氏杆菌 7.49%；沙门氏菌 5.73%；链球菌 5.29%；蜡样芽孢 杆菌4.85%；变形杆菌3.08%，厌氧拟杆菌5.29%；厌氧梭杆菌2.2%；厌氧消化链球菌3.08%；厌氧G+无芽 孢杆菌2.64%。 关键词：牛；子宫内膜炎；病原菌；分离鉴定 母牛子宫内膜炎是母牛产后由于细菌感染而造成的繁殖障碍性疾病，往往发生在母牛产 后 1～4 周，引起母牛妊娠推迟，繁殖率下降，甚至造成不孕。据报道，从子宫内膜炎患牛 子宫内分离到的细菌主要有大肠埃希氏杆菌、葡萄球菌、链球菌、棒状杆菌、变形杆菌、克 雷伯氏菌等，但是由于母牛所处的地域和饲养管理条件不同，国内外报道的致病菌分布也不 一致。本研究以豫南地区患子宫内膜炎的母牛为对象，通过病原菌的分离鉴定找出主要致病 菌，为其有效治疗提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验地点 于河南省驻马店地区及其周边地区（漯河、平顶山、南阳）共 4 个规模化 养牛场和 35 个散养户取样；于河南农业大学动物疫病检测中心和河南农业大学牧医工程学 院微生物实验室作病菌分离、鉴定。 1.1.2 试验对象 对调查地区产后 21～30d 的分娩牛进行产后检查；根据B 型超声诊断法、 阴道检查法、直肠触诊检查法 3 项指标综合诊断为患子宫内膜炎的病牛 60 头。 1.1.3 试验时间 2009 年 1 月～12 月。 1.1.4 试验培养基 犊牛血清培养基、5%的绵羊血培养基，按常规方法配制；脑心浸液培 养基、尹红美兰琼脂培养基、麦糠凯琼脂培养基、营养肉汤培养基、肠杆菌科细菌生化常规 鉴定管、葡萄球菌属细菌生化鉴定管、及其它细菌生化常规鉴定管等均购自杭州天和微生物 试剂有限公司。 1.1.5 试验试剂 葡萄糖、营养琼脂、氯化钠、可溶性淀粉、维生素 k1 、胰酪胨 、大豆胨、 硫乙醇酸钠、Nacl 、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、美蓝、氯化血红素、氢氧化钠、95%乙醇、1% 盐酸二甲基对苯二胺、溶液酵母膏、磷酸氢二钾、酵母浸出物、酪蛋白水解物、琼脂、磷酸 氢二钾、牛肉膏、L-精氨酸、丁二酸钠、1% α-萘酚- 乙醇溶液、半胱氨酸、对二甲氨苯甲醛、 异戊醇、浓盐酸、尿素、蛋白胨等。 ∗基金项目:现代农业 （肉牛）产业技术体系建设专项基金资助。作者简介:王子恒（1986-）男，河南遂平人，兽医硕士，研究方 删除的内容: 向：兽医产科学；河南省遂平县天悦生态养殖合作社 理事长。E-mail:wzhgold@163.com 通迅作者:邓立新(1963-),男,湖南宁乡人,兽医博士，副教授,研究方向: 兽医影像学、兽医外科、产科学。E-mail: Lx8198@ 1.2 方法 1.2.1 采样方法及病料处理 对患牛进行保定后，掏空母牛直肠内的宿粪。用 5%高锰酸钾 溶液或 2%新洁尔灭冲洗肛门及外阴部；然后，操作者右手伸入直肠内，把握好子宫颈口， 左手把经过高压蒸汽灭菌并套上一次性塑料外套的输精器通过阴道送入子宫内；当输精器进 入子宫时，由助手回拉抽出输精器，使输精器塑料外套留在子宫内；再由助手将灭菌的一次 性注射器与输精器塑料外套连接，缓慢抽出子宫内容物，立即在酒精灯旁把所采的子宫内容 物一部分注入灭菌瓶中，一部分注入经高压灭菌的营养肉汤内。如抽不出子宫内容物可将 30～50mL 生理盐水注入子宫，轻轻按摩子宫 30s，使液体充分与宫腔接触，然后吸取部分 洗液至消毒管内，立即送往实验室。在超净工作台内将所采病料分为两部分:一部分放入摇 床培养 12h，另一部分作厌氧培养；并把采取的样品直接涂片，分别进行碱性美兰染色和革 兰氏染色，显微镜下观察细菌的形态，初步确定病原菌的种属。 1.2.2 细菌的分离与生化鉴定 取回来的样品分别用营养肉汤，厌氧菌肉汤增菌。前者放置 37℃温箱内培养 18h～24h ；后者放到厌