从代谢组学角度探讨白附片对正常和肾阳虚证大鼠毒性反应差异.pdfVIP

海峡两岸中医药发展大会 Cross—StraitConferenceonthe ofTraditionalChinese Development Medicine 从代谢组学角度探讨白附片对正常和肾阳虚证大鼠 毒性反应差异 谭勇1 吕诚1 吕永恒2李小冰1许国旺3吕爱平1’ 1．中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京1007002．天津市南开区理疗医院 3．中国科学院化学物理研究所 辨证论治是中医药学理论的特色与精华，是中医临床、科研必须遵循的基本准则。“证”是疾病在发展过程中 某一阶段病理变化的全面概括。根据《黄帝内经》“有故无殒”的中药毒性理论，用药只要对证，药物毒性自然减 低。这反映了中医强调药物毒性具有相对性和必须结合证候来评价中药毒性的理念。因此，以中医药学独特的思 维模式与辨证理论为指导，选用恰当的中医病证动物模型评价中药的毒性，才能得到能够真正准确反映中药毒性 的结果，才能为确保临床安全、有效、合理用药提供科学依据。本研究结合代谢组学方法探讨白附片对正常和对 证模型大鼠毒性反应的差异，为基于中医证候理论评价中药毒性提供客观依据，为深入分析证候与中药毒性关系 提供方法学探索。 1材料 1．1动物SPF级雄性SD大鼠80只，体重(200±20)g，由军事医学科学院提供【合格证号：SCXK-(军) ℃，食用全价营养颗粒饲料，饮用纯净水。 1．2药物和试剂注射用氢化可的松琥珀酸钠粉针剂(天津生物化学制药有限公司，生产批， 提取制成29．mL-1的溶液(由中国中医科学院中医基础理论研究所方证研究中心提取)。提取工艺；①白附片加 入8倍量的60％乙醇中浸泡40min，回流2h，滤过：②再加入6倍量的60％乙醇，回流lh，滤过：③合并滤液， 磷酸鸟苷(cGMP)放射性免疫试剂盒由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。代谢组检测用试剂由中国科学院化 学物理研究所色谱研究分析中心提供。 Performance 1．3主要仪器Sn．69513型免疫计数器，液相色谱系统采用ACQUITY-Ultra Liquid CORP， MS Chromatographysystem(Waters Technologies，Manchester，UK)。 2方法 2．1模型的建立大鼠臀部iIIl氢化可的松琥珀酸钠溶液，剂量为35．715mg．Kg—1．d-1，连续9d。 2．2实验分组80只大鼠适应性喂养7d后随机分为正常组和模型组，造模结束再把两组大鼠分别随机分为 低剂量、小剂量、中剂量和大剂量4个给药组和空白对照组，每组8只。 2．3给药方法分组当天对给药组和空白对照组大鼠分别灌胃给予白附片溶液和生理盐水。给药浓度从低到 高依次为：0．32 g，O．“g，1．28g和2．56g．Kg·1．d·l。连续14d。 2．4血清和血浆的制备ip3％戊巴比妥钠1．5mL．Kg-l麻醉大鼠，暴露股动脉，快速剪断血管，用吸管吸取 血样，制备血清和血浆。 谱．质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物。 2．7统计方法采用广义线性模型两因素方差分析，显著性水平取P0．05。代谢物指纹图谱数据采用正交 偏最小二乘法对数据进行挖掘。 3结果 439 鲨墨篓鋈茎些型型!堡些型竺!!些 3 1肾日m模型相关指标的变化 表1掰组肾阳虚模型相关指标的比较(i地 表l显示模型空由对照组的ACIH显著低于正常空自对照组。两组COP．随着剂量的增加有升高的趋势． 遗模园索引起c脚的下降和oGMP的升高，随着剂量的增加．模型组cAMP有升高