基质稀释同位素质谱法测定微量富氘生物样品δD值的研究.pdfVIP

基质稀释同位素质谱法测定微量富氘生物样品国值的研究 刘子阳贺义惠文先红朱天强 浙江大学化学系，杭州310027 摘要：建立了用基质稀释同位素质谱法测定微量富氘生物样品的方法，用牛血清白蛋白作基 质，将富氘生物样品用牛血清白蛋白稀释而制得混合样品，通过测定基质牛血清白蛋白和含 有生物样品的混合样品的国值反应生物样品的氢同位素组成。采用该方法我们成功地测定 了牛血清白蛋白及富氘生物样品用牛血清白蛋白稀释而成的混合样品的,6D值。 关键词：基质稀释，同位素质谱，生物样品 l前言 氢同位素研究广泛地应用于水圈、岩石、矿床、矿物等领域，如通过测定海水【l】、雨 水[21以及热液成矿嘲的氢同位素比值(2D／1H)，研究氢同位素在时间、空间上的运移和分布 规律以及成岩成矿的基本理论。有机物的氢同位素组成能够提供有关古环境气候研究领域 【4】、环境污染物的研究领域【5，61及有机能源【7，81研究领域等方面的重要基础数据，因而研究有 机物氢同位素有着重要的意义。有机物氢同位素一般测定方法是将有机物中氢元素用氧化剂 燃烧氧化为H20，再将H20还原为H2用于质谱测定或是将有机物中氢元素通过热裂解直接 转化为氢气用于质谱测定，但有机物用量一般至少为5mg[9,10】。近年来，迅速发展的生命科 学提出了测定微量富氘样品中的氘含量问题【l卜13】。生命科学的一些领域只能提供微克量级的 生物富氘样品，因而不能用传统的有机物氢同位素测定方法测定此类生物样品的氢同位素组 成。我们发展出基质稀释同位素方法即实验中选择与该生物样品具有相似性质的生物试剂做 基质，将生物样品定量均匀稀释于基质中制成混合样品，通过分别测定基质和混合样品的氢 同位素组成而反映生物样品的氢同位素组成，从而为微量富氘生物样品或有机样品的氢同位 素分析提供有效的分析方法。 2 实验部分 2．1试剂及样品 普技术开发公司)，牛血清白蛋白(BSA)(上海化学试剂厂)。 2．2实验仪器、装置及操作步骤 均匀混合物倒入瓷舟后放入石英管中。加热到100℃保持20分钟除去吸附水，待系统的真 空度2x10之Pa时，将样品舟推入预先恒温在850。C的燃烧炉进行分解氧化，反应产物再通过 净化炉充分反应生成水、二氧化碳以及氮和硫的氧化物等，将其用液氮收集在冷阱中。换用 酒精冷液(-78。C左右)冻住水，分离出其它杂质气体，然后将水转移至装有锌粉的样品收 的电炉 机械泵+扩散泵 图1．制样系统流程示意图 中加热2小时，水被还原为氢气。制各出的氢气用气体同位素质谱仪MAT-251测定，以QYTB 为工作标准，测定样品的6D值。6D值以世界通用的氢同位素标准SMOW(标准平均大洋水) 51。 分别表示样品和标准的2D／1H比值，6D值只取整数【l 3 实验结果及讨论 3．1 BSA样品的氢同位素组成的测定 测定基质BSA的氢同位素组成，基质BSA用量为5mg，实验结果列于表l。基质BSA 的6D值范围为．7l到．80，平均值为．76，标准偏差为士2．7‰，有较好的重现性。这与现有的 标准分析方法【16】所要求1‰—2‰基本相当，也与Begly等m谰CF．IR_MS方法20／oo接近。 表1牛血清白蛋白(BSA)N定结果 3．2基质牛血清白蛋白加有不同生物体的混合样品8D值的测定 测定不同用量的生物体A或B加入5mg牛血清白蛋白而成的混合样品扣值，测定结果 在纯牛血清白蛋白的测定结果．7l到．80范围内。可能是生物体A的国值和牛血清白蛋白 的国 表2牛血清白蛋白中加入生物体A或B所得混合样品测定结果 注：a表示给出结果为两次测试结果平均值； l群混合样品为生物体A加入牛血清白蛋白中制成；硝混合样品为生物体B加入牛血清白蛋白中制成。值差 65 异不大，加入生物体量为5ug时因量太少不足以引起混合样品国值的变化。当生物体B加 入量为5ug时，混合样品的6D值与纯牛血清白蛋白的国值有明显的差异。无论基质牛血清 白蛋白中加入生物体为A还是B，混合样品的扣值都随着生物体用量增加而增大。当