尖锐湿疣组织中端粒酶活性和HPV感染的研究.pdfVIP

B26．尖锐湿疣组织中端粒酶活性与HPV感染的研究 中南大学湘雅医院传染科、皮肤科(湖南长沙410008) 谢红付范学工冯浩 尖锐湿疣为人乳头瘤病毒(human 的HPV型别有100多种。有研究发现，端粒酶活性增强不仅可见于一些肿瘤性疾病，在某些非恶性皮 肤病中亦可出现。为了探讨尖锐湿疣组织中端粒酶的表达以及HPV感染是否对端粒酶活性有影响，我 们用TRAP法检测了尖锐湿疣皮损中端粒酶的活性，并采用荧光定量PCR测定皮损中HPV型别及定量。 1．材料与方法 18—56岁，平均37岁，病程2周一1年。均为初发未经治疗者，经临床及醋白试验诊断为尖锐湿疣： 对照组正常人15例来自湘雅医院门诊手术室包皮环切病人。 1．2方法 端粒酶失活作阴性对照，阳性对照为永生化的人胚肾细胞(293细胞)提取物。在0．5m／EP管中依次加 中进行以下循环：25。C30min再于95。C5min预变性后，以94％30s变性，50。C30s退火，72％90s延伸． 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析PCR产物。 和热磁电子有限公司]及人类乳头瘤病毒(rmv)核酸扩增荧光检测试剂盒(购自中山大学达安基因股 份有限公司)，按试剂盒说明书操作进行：组织用无菌生理盐水洗涤两次，加5叽lDNA提取液，混匀， 沸水浴10min，4℃放置6—8小时。10 102管，每管取5出进行PCR反应。将已加样的各反应管放人反应槽内，按对应顺序设置阴性对照，定 量标准品浓度梯度以及未知标本，按以下条件循环：93℃2min预变性，然后按93℃45s至55。C60s做 线或与标准曲线无交点则判为阴性，反之为阳性。 1．3统计学处理：用SPSS统计软件进行统计学分析，两样本均数比较用t检验；应用几何均数对 相关性。 2．结果 成的梯形图，条带的相对数量和显色强弱与端粒酶活性程度相一致，在本实验中电泳显色结果亦与酶标 一164— 结果相符。 粒酶活性，有统计学差异(t=10．13，P0．01)，见表1。 表1端粒酶活性f01)值)在尖锐湿疣和正常组织中的表达 注：*与正常对照组比较，t=10．13。P0．01 表2尖锐湿疣皮损中端粒酶活性(OD值)与HPV病毒分型和病毒定量《k；G) 注：*与单纯HPV6／11型阳性皮损比较，t=2．578，P0．05 **与端粒酶活性无明显相关，P0．05 2．2 HPV分型及定量 35例HPV6／11型阳性患者病毒量为6×lOo一8×106拷贝。 2．3端粒酶活性与HPV分型及定量的相关性 著相关(P0．05)。 3．讨论 分别引起抑癌基因圃和pRB降解，继而导致肿瘤形成。而经研究发现外阴尖锐湿疣患者虽然常合并 HPVl6／18型感染，病原体检测多为HPV6／11型，我们的研究结果也证实了这一点。 端粒是位于真核细胞染色体末端由短串联重复DNA序列及其结合蛋白组成的特殊结构，不含编码 区，在人体内长度大约为5。15kb。有保护染色体结构基因，防止染色体末端融合等重要作用，并与细 胞转化、永生化和肿瘤发生密切相关。端粒DNA的复制有赖于一种特殊的末端转移酶即端粒酶的作用， 在多数正常体细胞中端粒酶活性被抑制，而少数细胞由于端粒酶活化而得以永生化，在这些细胞中端粒 长度维持稳定。近来有研究发现在某些良性增生性皮肤病中亦可以出现端粒酶活性增强，如银屑病，巨 大型尖锐湿疣等，因此有学者认为端粒酶活性更可能是细胞增殖而不是恶性化的标志。而基于尖锐湿疣 是一种良性增殖性疾病，我们推测尖锐湿疣患者皮损中端粒酶活性应有改变，而我们的实验结果发现与 正常人相比较尖锐湿疣患者皮损中端粒酶活性明显增高。 本实验还观察到，不仅HPV感染可影响端粒酶活性，而且不同病毒型亦可对其有影响，合并有高 危型I-IPV感染的皮损中端粒酶活性明显高于单纯低危型HPV感染者，但与病毒含量无明显相关。现已 现，细胞出现永生化现象并证实与端粒酶的表达有关。但目前对此一直存在争论，有研究认为高危型 HPV与端粒酶激活之间无明显相关性，实际研究中有关低危型HPV6／11型对端粒酶活性的影响研究较 少，因此对外阴尖锐湿疣端粒酶活性及与病毒分型相关性研究实属必要。分析我们的实验结果认为HPV 感染可影响皮损的端粒酶活性，高危型HPV对端粒酶活性的影响更强，可能与其易引起恶性变有关， 而外阴尖锐湿疣多由低危型HPV引起，因而难以出现恶性变。 虽然仍需更