牛卵母细胞玻璃化冷冻和体外受精研究.pdfVIP

第-t-二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 牛卵母细胞玻璃化冷冻与体外受精研究 禹学礼1辛晓玲2粟颖华3王新庄4邓雯1庞有志1挛晓霞1冉林武t (1河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003 2河南省农业科学院．河南郑州450002； 3河南白马寺种公牛站，河南洛阳471013； 河南省肉牛胚胎I程中心，河南郑州450003) straw)法和细管法对未成熟的C(X；s进 (IVC)的基础上，分别采用开放式往长细管(oPs，openpulled 分别为59 0％ ±58，差异极显著(PO．01)；卵裂率分别为18．5％±2．0和32．8％±1．4．异极显著(P001)；8一 细胞阶段的成功率分别为14 0和5．6％±1 璃化冷冻法可以便未经成熟培养的牛00＆冷撩后获得桑葚胚和囊胚，但桑囊胚发育率仍较低，方法 有待改进。 关键词：牛；卵球卵母细胞；玻璃化冷冻；体外受精 从屠宰厂废弃卵巢中获取卵母细胞，己成为 胞进行了冷冻保存和体外受精。上述研究均是 牛体外受精、核移植、单精子注射等相关胚胎工 将卵丘卵母细胞(COOs)体外成熟培养后再进行 程技术的主要材料来源。将卵母细胞冷冻保存， 冷冻、解冻和体外受精实验，在此基础上，Wani 可以随时利用，为牛胚胎的体外生产及相关生物 技术的实验研究提供充足的来源和极大的便利； 再行IVM、IvF的研究；迄今为止，国内尚未见 同时，也是保存牛品种资源的一种经济有效的手 对牛COCs的冷冻研究。本研究分别采用OPS 段。自从上世纪八十年代以来，人们对哺乳动物 法和细管法对未经成熟培养的COCs进行玻璃 化冷冻，并探索不同冷冻方法对牛COCs的 卵母细胞的体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和 早期胚胎的体外培养(IVC)进行了大量研究，建IVM、IVF及早期胚胎体外发育能力的影响。 立了比较系统的方法【1,21；HamanoS等拉J 1材料与方法 1．1材料1．1．1卵巢来源和保存：牛卵巢采自洛 (1992)和SahaS等【41(1996)成功地对牛卵母细 基金项目：国家“十五”重大科技攻关计划之子项目(编号：2002BASl4A一2—2)；河南洛洛阳市科技攻关重大项目(编 号：030218)。 作者简介：禹学礼(1963一)，男。副教授。硕士。研究方向：动物胚胎生物技术。 ccmt 电话：0379—4282333 E—mall：yxll4282333@sina 第-t-二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 阳市春都清真牛羊屠宰有限公司，牛宰杀后 i．2．2 COcs冷冻和解冻：玻璃化冷冻液以 10rain内取出卵巢，置于30C左右的保存液中，mPBS为基础液。添加20％乙二醇、20％DMSO、 于2小时内运回实验室。卵巢保存液为：PI强液 +20ram BSA。 Hepes+300Iu／rnl青霉素+0．3耐fnl N 链霉索+50／19／rnl庆大霉索。 细管玻璃化冷冻：采用WaniA等【51 1 l 2主要试剂和设备：BSA购自天津市正江高 科技有限公司；TCM一199购自GiBco；Pecoll 中5 液为Pharmacia；FSH、LH来自宁波市激素制品mi