原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
发酵工程学科的进展
——第四班奎圆发酵工程学术讨论套论文集
氨肽酶高产菌选育的研究
各海先，王健，吴庚勋，韩笑，赵光鳌
(江南大学生物工程学院，无锯214036)
精要：采用萦外线，co．o、N+注入方法诱变米曲霉A--16菌株，最终筛选获得2株氪肽群
商活力产生首M60—5—13和M80一10一7，经多次传代实验表明两菌株遗传稳定性总好．
对M80一10一7苗进行发酵条件优化，使产酶水平进一步提高，摇瓶发酵水平达到647．1％，
比原苜产酶水平提高了5．3倍。
关键词：紫外线；CO—IN+注入I诱变育种I氨肽酶
氨肽酶是一类从肽链N端顺序水解，使氨基酸逐个游离出来的外切型酶，对疏水性
氨基酸有很强亲和力，能使蛋白质得到较彻底的水解，可广泛应用于调味品行业，酿造行
业及多肽制品的脱苦眯中。
1材料与方法
1．1菌种
米曲酶(Aspergillusoryzae)A--16本室保藏。
1．2培养
1．2．1培养基
分离培养基(g／L){蔗糖30，LNA0．5，MgSq7HzO0．5，KH2Pnl0．0，琼脂粉17，
pH6．4。
斜面培养基(g／L)：麦汁培养基，5～6。Be麦汁，琼脂粉17，pH6．0。
种子培养基：麸皮水=1；1。
0．5，KH2PO‘10．0，cack1．0，
发酵培养基(g／L)：玉米浆30。麸皮60。MgSO‘7H20
pH6．8。
1．2．2培养条件
种子和平板培养：在(31士0．5)℃恒温箱中培养?2h。
发酵培养t(31士1)℃，220r／min摇床振荡培养64h。
1．3菌种诱变
1．3．1紫外线诱变：
将纯化后的菌株制成孢子悬液在元菌平皿中放约101m，于磁力搅拌器上磁了搅拌，
紫外灯照射0min、10rain、15rain、20rain、25min取样稀释涂布于平皿之上。
1．3．2CO。射线照射诱变；
将装有适量抱子悬液的试管置于一定剂量率的辐照平面上，用cO”射线进行辐照诱
答海先等：氨肚酶高产苗选育的研究
变，照射剂量分别为4、6、8、10、12、16万仑琴，处理后进行梯度分离于平皿之上。
。
1．3．3N+注人诱变：
s、20s、403、608、80
率，分别按)Os(对照)、10 s不同时间作注人处理，分离于平皿之上。
1．3．4高产菌株的筛选
从分离平皿中挑选水解圈相对较大的单菌落．摇瓶筛选。
1．4发酵条件的初步优化
在原有发酵培养基基础上，进一步优化碳渌和氮源配方，确定最佳浓度、合适的碳氮
比，以及研究表面活性剂对产酶的影响。
1．5酶活测定
单位。
2结果与讨论
2．1诱变效果
2．1．1紫外线诱变结果
A—16菌株经不同剂量紫外线照射处理，再通过摇瓶初筛，复筛获得Au一2菌株，
1％，其结果如表1、表2。
寰l菌株A--16在不同处理时间时的致死率
’
2．1．2C口。射线照射诱变结果
采用6组不同剂量CO”射线对菌株U2进行辐照诱变处理，同时以处理前孢子悬浮
液作为对照。其诱变结果如表3、表4所示，规定酶活力高于出发菌株5％为正突变，正突
变一正突变菌株数／活菌数。
裹3不同剂量coy。对U2葡株致死率
44 第四次全国发酵工程学术讨论会
从表2可以看出，当辐照剂量为12万仓琴时，变异菌出现正突变率的频率较高，致
比Au一2菌提高了42％，复筛摇并结果如表5。
表5 c0”辐射菌复筛结果
编 号 Au一2(对照) coo
文档评论（0）