DNS比色法对果胶酶酶解产物测定条件地研究.pdfVIP

DNS比色法对果胶酶酶解产物沁定条件的研究 崔 莉，张陈虎，钱国坻，高卫东，范雪荣 (江南大学纺颤服装每院，江苏无锡) 摘要：通过试验确定了DNS比色法对果胶酶酶解产物的测定条件，从而为纤维素酶和果胶酶组成的复 合酶对棉织物精练处理后魄混合产物的测定方法提供了一定的基础。 关键词：DNS比色法；果胶酶 随着酶应用技术的不断进步和酶制剂的研究 282型震荡恒温水浴锅，江苏金坛金南设备厂。 开发，酶在纺织工业中的应用更加广泛，酶对织物’ 2 试验方法 处理效果的评定方法也引起了普遍的兴趣，而酶活 与处理效果关系密切。目前常利用不同的物质作为 2．1试剂的配置 底物，测定一定条件下酶解产物的增加或底物的减 少来反映酶的活性。但对于两种以上的复合酶，由 0．1mol／L的盐酸配成pH=8．5的缓冲溶液。 于底物和产物的不同，复合酶的活性测定就具有一 (2)葡萄糖溶液的配置：称取0．0059烘干至恒 定的允度。DNS比色法是还原糖和纤维素酶活力常 重的葡萄糖溶于不同pH值的水溶液中，定容至 用的测定方法，且DNS试剂配置容易，反应时问 50ml。 短。果胶酶对果胶质起解酯、裂解、水解作用，产生 半乳糖醛酸和寡聚半乳糖醛酸或不饱和的醛酸和 水杨酸，309的四水合酒石酸钾钠，溶解，定容至 寡聚半乳糖醛酸等物质，它们均含有一定量的醛 100m|，通过诃节氢氧化钠的用量控制试剂的pH， 基，因此具有一定的还原性．在一定的条件下可以 分别配置成不同pH值的DNS试剂。 和具有氧化性的物质发生反应，从而通过确定产物 (4)酶解液的制备：称取一定量的棉布，用 量来间接的反应其活性，本文采用DNS显色剂对果 pH=8，5的缓冲溶液配置成一定浓度的果胶酶一 胶酶对棉织物酶解产物的测定条件进行研究，并与 同装入250ml的三角烧瓶，并加一定量的助剂jn一 标准葡萄糖溶液与DNS试剂的显色条件进行比较， 1，在60℃的恒温震荡水浴锅中加热一定的时间，倒 认为可以用DNS试剂测定纤维素酶和果胶酶组成 出在100℃的沸水中灭酶，冷却后得酶解液。 的复合酶的酶解产物。 2 2 测定方法 将一定量的葡萄糖溶液(或酶解液)与DNS 1 试验材料和设备 试剂一同加入到25ml的容量瓶中，在沸水浴中加 1．1试验材料 热一定的时间后取出，用流水迅速冷却，定容后以 纱卡(2016128×66)，无锡维新漂染厂提DNS试剂为空白测吸光值OD。 供；DNS(3，5一二硝基水杨酸)，上海化学仪器公司 3 试验结果与讨论 四水合酒石酸钾钠，江苏无锡药品采购站试剂分公 司；葡萄糖，中国医药上海化学试剂公司；碱性果胶 3．1 DNS试剂对葡萄糖溶液的测试条件 酶，丹麦诺和诺得公司提供；助剂jn～l。 由于DNS与葡萄糖的显色反应要在一定的 I．2 试验设备 温度、时间、pH值的条件下进行，并且产物的吸光 721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司； 值与选择的波长有关，所以首先对显色反应的时 间，pH值以及波长等几个方面加以研究，从而确定 PHS一2C精密数显酸度计，上海伟业仪器厂；FA／ JA系列电子天平．上海精密科学仪器有限公司； DNS对葡萄糖标准溶液的测试条件。 3．1．1 101A～1型电热鼓风干燥箱，上海市仪器厂；SH一 吸收波长与吸光值的关系一最佳吸收波长