H7N2禽流感病毒分离株探究%3aⅠ.两株鸡源H7N2禽流感病毒分离鉴定.pdfVIP

家禽传染病 性血清相遇能形成明显的沉淀线，证明分离病毒为H9亚型。 2．5 MDT=(40x3+48x4)／／--44．57h。 2．6鸡致病力试验结果：试验鸡在注射后12小时左右开始出现精神沉抑、拉白绿色粪便、食欲减退等 症状。24小时开始死亡，剖解病变主要是气管出血的粘液、心脏冠状沟出血、肝出血、脾出血、胰出血有 的坏死。回归鸡胚能使11日龄鸡胚致死。 3结论与讨论 3．1根据血清学试验、病原血清型鉴定、鸡致病力的试验以及通过送中国农科院哈尔滨兽医研究所进 行NA亚型鉴定，确定所分离的病毒为致病力较低的H9N2亚型禽流感病毒。该病毒的来源、遗传变异的 一些分子生物学特性及与H5、H7的关系，还有待进一步的研究。 3．2禽流感传播速度快、危害严重，是一种烈性传染病，至今没有特效的药物治疗和有效的防治措施。 禽流感血清型多，变异快，给疫苗的研制带来一定的困难。控制该病使用疫苗是有效的途径。 参考文献略 王传彬田克恭王宏伟孙明遇秀玲金萍陈西钊 (农业部兽医诊断中心，北京100094) 摘要：采用鸡胚培养法，从病鸡组织中获得了两株分离物，均可凝集鸡红细胞：经纯化后负染作电镜 观察，可见球形、外被囊膜的病毒颗粒，直径约90-100nm：经血凝抑制试验和神经氨酸酶试验鉴定为 血凝素为H7亚型；两个病毒的血凝素蛋白的裂解位点均只含一个碱性氨基酸，表明两者均为低致病力毒 株。 关键词s禽流感病毒，H7N2亚型，分离鉴定，HAl基因 ． 禽流感病毒的血凝素包括Hl—H15种亚型，其中H5和H7亚型常为高致病力的禽流感(HighPathogenic Avian 类健康，世界各国政府对其都极为重视，是世界动物卫生组织(0IE)规定的A类传染病【2】【31，我国也将 此病列为一类动物疫病一J。 近年来，H5亚型禽流感在亚洲肆虐，受到人们的关注，但不可忽略的是，H7亚型禽流感也常是高致 病力的禽流感病毒，近年来H7小吐在北美造成了重大损失，2003年荷兰还发生了H7亚型禽流感感染人的事 件，而最近发生于朝鲜的H7亚型禽流感又带来了新的威胁。因此对国内H7亚型禽流感病原进行研究，对 于动物疫病防制具有重要意义。但是，到目前为止，我国已经鉴定和分离到的AIV包括H1、H3、H4、H5、 H9及H14等亚型，尚未见关于鸡群H7亚型AIV分离株的正式报道。 本文报道了从国内鸡群分离鉴定了两株H7N2亚型AW，并测定其HAl基因序列，分析其潜在致病力， 可为H7亚型禽流感的防制研究提供技术数据和实验材料。该文中所指的第2个病毒分离株A／Chicken／ 556 第六次全国会员代表大会暨第l1次学术研讨会 实验室进行了复核试验。 1材料 1．1病鸡组织 病鸡肺、肝、脾组织，取自2002年4月和11月河北省的临床送检蛋鸡。 1．2SPF鸡胚 10日龄SPF鸡胚，购自北京实验动物研究中心，附监测报告(禽流感阴性)。 ’ 1．3抗禽流感病毒血凝素标准血清及抗原 禽流感病毒H5、H7、H9亚型阳性血清及抗原：购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。 1．4抗禽流感病毒神经氨酸酶标准血清 禽流感病毒HINl、H2N2、H5N3标准血清：日本北海道大学兽医学院惠赠。 1．5新城疫病毒标准阳性血清及抗原 新城疫病毒(NDV)标准阳性血清及抗原购自中国兽医药品监察所。 1．6RT-PCR引物 自行设计，由赛百盛公司合成。 1．7分子生物学试剂 DNA聚合酶、AMV反转录酶均购自Promega公司。 总RNA提取试剂盒、Taq 1．8主要仪器设备 透射电子显微镜，日立公司生产；高速、超速离心机，索福公司产品；鸡胚孵化器，美国Lyong公司 II型。 一 产品；生物安全柜：Bellco 2方法 2．1病毒分离 死亡后，收集尿囊液，用同样方法作传代培养