注射用熊胆粉与其原料熊胆粉指纹图谱研究.pdfVIP

注射用熊胆粉及其原料熊胆粉指纹图谱研究 沈丽娟 丁桂兰 唐秋竹 吉林省药品检验所 长春 130062 摘要 目的 用高效液相色谱法建立注射用熊胆粉及其原料熊胆粉指纹图谱的分析方法 方法 采 用RP-HPLC法 色谱柱 Shim-pack VP C 18 4.0 150 mm 5 m 流动相 甲醇-0.03mol/L 磷酸二氢 钠溶液 梯度洗脱 检测波长 210nm 结果 样品中各成分得到较好的分离 指纹性较好 方法学 考察表明 本法具有较好的重现性 指纹图谱相似度评价相关系数均大于0.9结论 本指纹图谱可 作为熊胆粉 注射用熊胆粉具有专属性的指纹图谱 适于作熊胆粉及其制剂的质量控制方法 关键词 熊胆粉 注射用熊胆粉 指纹图谱 注射用熊胆粉是以引流熊胆粉为原料 经精制处理而得的冻干制剂 目前尚未见文献报道有关 熊胆粉及其制剂的指纹图谱研究 按 中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 暂行 1 采用高效液 相色谱法对熊胆粉及其制剂-注射用熊胆粉进行指纹图谱的研究 结果表明 该方法重现性好 可操 作性强 1 仪器与试药 岛津LC-10AT VP高效液相色谱仪 自动进样仪 UV检测器 浙江大学N-2000色谱工作站 试 剂 甲醇为色谱纯 水为超纯水 磷酸二氢钠 磷酸均为分析纯 牛磺熊去氧胆酸钠对照品 购自 中国药品生物制品检定所 批号 0816-9903熊胆粉 引流 由吉林省延边经济动物研究所养熊 场提供 注射用熊胆粉及其中间体由延边医学院化学中药实验室提供 2 实验方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱 岛津 Shim-Pack VP C (4.0150)mm,5m二元梯度洗脱 A 相 甲醇 B 相 0.03mol/L 18 磷酸二氢钠溶液 检测波长为 210nm 流速为 1mL min- 1 进样量 20 l 各组分在 76 分钟内全部 出完 2.2供试品溶液及参照物溶液的制备 参照物溶液的制备 取牛磺熊去氧胆酸对照品 加甲醇制成每 1ml 含 1mg 的溶液 作为参照物 溶液 供试品溶液的制备 取注射用熊胆粉及其中间体各30mg 取熊胆粉40mg 分别置5ml 量瓶中 加甲醇使溶解并稀释至刻度 摇匀 用0.45 m 微孔滤膜滤过 即得 3 方法学考察 3.1稳定性试验 取注射用熊胆粉 批号 020826制得供试液后 每间隔一定时间测定一次 考察各共有峰的 相对保留时间及相对峰面积比值的一致性 结果显示供试品溶液在 28小时内 稳定性良好 其各共 1 有峰相对保留时间的RSD为0.35%1.10%相对峰面积比值的RSD为2.19%,符合指纹图谱的要求 3.2精密度试验 取注射用熊胆粉 批号 020826制得供试液后 连续进样测定 5次 考察各共有峰的相对保 留时间及相对峰面积比值的一致性 结果显示精密度良好 各共有峰相对保留时间的RSD为0 0.43% 相对峰面积比值的RSD为1.56% 3.3重现性试验 取注射用熊胆粉 批号 0208265份 分别制得供试液后 依次进样测定 考察各共有峰的相 对保留时间及相对峰面积比值的一致性 结果显示重现性良好 各共有峰相对保留时间的RSD为0 相对峰面积比值的RSD为1.82% 4 指纹图谱的建立与分析 按上述色谱条件 分别对 10批注射用熊胆粉及其中间体 10批原料熊胆粉进行测定 考察 10 批样品液相色谱图的一致性 从全谱看 18分钟以前有若干密集的小峰 难以进一步分离 且这一部 分特征在制剂 原料的各批样品中差异很大 其占全谱量的比例很小 故在色谱峰的处理上 对 18 分钟以前的区域 不进行积分 计算 考察 10批样品的色谱图 找出其相对稳定的共有峰 以牛磺 熊去氧胆酸峰为参照峰 6号峰 其它峰以阿拉伯数字按顺序标定 注射用熊胆粉及其中间体共标定 8个共有峰 熊胆粉共标定9个共有峰 为便于比较原料与制剂之间的相关性 供试品溶液以同种溶 剂 同种方法制备 选择同一色谱条件 相应的共有峰号以相同号码标记 缺者为空 指纹图谱见图 12 3 以参照峰的相对保留时间和相对峰面积比值为1计算各共有指