益心脉颗粒对缺血再灌注损伤心肌超微结构保护作用地研究.pdfVIP

第五次全国中西医结合血疥证及活血化癣研究学术大会 2夕 006 益心脉颗粒对缺血再灌注损伤心肌超 微结构保护作用的研究 方显明 杨建设 肖柳华 刘钧超 广西中医学院第二临床医学院(南宁，530011) 近年来的研究证实，中药对心肌缺血再灌注损伤的治疗作用，与保护心肌细胞和线粒体结构的完 整有密切的关系。本实验结合中医对心肌缺血再灌注损伤的理论认识，采用具有益气通阳、化痰逐癣 作用的益心脉颐粒进行干预，观察该药对在体家兔心肌缺血再灌注心肌超微结构的影响，以期从亚细 胞水平上探讨其作用机制。 1材料和方法 1.1材料 1.1.1实验动物清洁级新西兰家兔25只(体重2-2.5kg)，雌雄兼用(广西中医学院动物中心提供桂 医动字11003), 1.1.2药物 益心脉颗粒(广西中医学院第二附属医院制，每克含生药2克)，VitE(浙江医药股份有限 公司新昌制药厂批号，复方丹参片(合肥神鹿药业有限公司批号二(006326), 1.1.3主要设备及仪器 JEM一1200EX透射电子显微镜 (日本产),ULTBACUFE型超薄切片机 澳〔地 利产)。 1.2 方法 1.2.1动物分组及模型复制 新西兰家兔25只随机分为5组:(A)益心脉颗粒大剂量组((1.6一1.4g/ 纯/day),(B)益心脉颖粒小剂量组(0.8一0.7g/纯/day),(C)VitE组(16.3一13.8mg/纯/day),(D) 复方丹参组(0.20一0.17g/Kg/day),(E)模型组。另以未给药未造模家兔作正常对照(CK)，用药组分 别按动物体表面积换算’剂量喂饲动物，连续给药7天。第8天参照文献x方法，以3%戊巴比妥静脉 麻醉，作颈正中切口，经右颈总动脉插管至左心室后固定。行气管插管，正压人工呼吸，开胸，暴露心 脏，结扎左冠状动脉前降支，60分钟后放松丝线，造成心肌缺血再灌注损伤模型，以ST段抬高为缺血 形成，以宽大畸形Q波出现作为模型复制成功的标准。 1.2.2超薄切片制做方法 正常对照家兔、用药组及模型组在缺血及再灌注各印分钟后，取动物心尖 部组织1mm3以生理盐水冲洗净残血，即以5%戊二醛 (磷酸缓冲液配制)固定2小时，经PBS液 (PH二7.2)两次漂洗，每次各10分钟，以I%四氧化饿固定2小时，再以PBS两次各漂洗10分钟，以 30%,50%,70%酒精按顺序实行梯度脱水各10分钟后以0.2%醋酸铀在4℃冰箱块染过夜，继以 80%190%,100%,100%酒精脱水，100%a丙酮过渡10分钟，以丙酮与环氧树脂按3:1,1:1,1;3、纯环 氧树脂的比例先后各渗透2小时，在40℃及60`C温度下用环氧树脂分别包埋聚合24小时，然后用超 薄切片机将标本切成700一800A.厚的切片，用柠檬酸铅染色5分钟，备观察用切片制做完成，在 ]EM一1200EX电镜下观察c 2结果 经电镜观察 器心脉大剂量组心肌组织超微结构显示 :心肌细胞内肌丝排列整齐.Z带、H带等清晰可 3口 第五次全国中西医结合血挤证及活血化癖研究学术大会 见，线粒体数量多，膜完整，靖及其上附着基粒结构清晰，无断裂，与正常心肌超微结构无明显差异;益 心脉小剂量组心肌细胞结构较清晰，线粒体膜完整，蜻有少量排列紊乱，但无空泡化现象;VitE组及复 方丹参组组织切片镜下超微结构显示:与正常心肌超微结构及益心脉大、小剂量组相比发现其心肌细 胞内肌丝排列有紊乱，线粒体数量明显减少，线粒体膜多有破裂，蜻断裂或呈无规则排列甚至消失;模 型组超微结构显示:心肌细胞内线粒体数目更为减少，线粒体膜破裂，蜻消失，膜较完整的个体内部呈 混沌状，结构模糊，有的个体内部空泡化，有的个体内部有高电子密度深染异常颗粒物质出现。见下 图 益心脉大剂量组(A) 益心脉大剂量组(A) 维生素E组(C) 复方丹参组(D) 模型组(E) 正常对照组(CK) 3讨论 线粒体是细胞能量的转换器，在不同的组织细胞中线粒体数量差异很大，一般生理活动高的组织 如心肌组织中其含量极为丰富，这与其为高耗氧量的心肌组织提供充足的能量有关。线粒体主要通过 存在于其内外膜、蜡及其边围