血清学诊断技术综合应用与检测质量控制.pdfVIP

血清学诊断技术综合应用及检测质量控制 王传彬博士 (农业部兽医诊断中心) 一、 血清学检测技术概述 (一)血清学检测的基础知识 血清学检测技术是建立在抗原抗体特异性反应的基础上的检测技术，最早的 血清学检测技术是出现于19世纪末的凝集实验。近20年来，血清学检测技术得 到迅猛发展。 1、抗原抗体反应的特性：可逆性、最适比例、特异性、敏感性； 2、利用抗原抗体进行诊断检测要考虑以下几个关键问题： ①研制诊断试剂的技术环节： 前期调研；获取原材料：抗原／抗体制备、提纯、标记；获取标准样品盘； 建立检测方法、实验室性能测试；组装试剂盒、临床测试。 ②如何提高检测试剂的性能： 特异性：取决于试剂纯度、针对的抗原位点 敏感性：取决于试剂活性、浓度、反应谱 重现性：取决于反应类型、产品成熟度 适用性：取决于检测的目的：诊断、监测、检疫、免疫效果评估、分型鉴定； 被检动物的背景资料：被检材料的取得 4、免疫测定在临床检验中的应用范围 (二)血清学检测技术的类型 血清学检测技术主要包括以下类型： 凝集试验： 免疫标记技术 直接凝集 荧光标记技术 间接凝集 放射免疫测定 IBJ接红细胞凝集 酶标记技术 I、ElJ接乳胶凝集 发光标记技术 问接胶体会凝集 沉淀试验 补体反应 絮状沉淀试验 补体结合试验 琼脂扩散试验 中和试验 免疫电泳 免疫电位传感技术 132 二、主要检测技术的操作要领、用途和局限性 目前在兽医学检测中最常用的技术有琼脂扩散试验，直接和间接凝集实验， 酶标、金标检测技术。 (一)脂扩散试验操作要领、用途和局限性 (二)血凝及血凝抑制试验操作要领、用途和局限性 (三)酶联免疫吸附试验(ELISA)操作要领、用途和局限性 (四)AIV免疫胶体试纸操作要领、用途和局限性 三、血清学检测技术的综合应用 每种诊断方法都有自己的优点和局限性。完成一次诊断监测工作，往往需要 综合运用几种方法，才能获得及时、完整的诊断监测结果。根据检测工作的性质、 工作量和疫病控制的需要，可以采取不同的技术方案。各种疫病的检测方法及其 用途见下表。 (一)检测病原微生物抗体 对于未接种疫苗的群体，抗体检测可以判断是否感染过该疫病。对于已经接 种过疫苗的群体，可以评估群体的免疫抗体水平，判断疫苗接种后的效果和群体 的免疫状态。比如鸡新城疫、猪瘟等病的抗体检测。 对于接种过灭活疫苗的群体，采用某些检测病毒非结构蛋白抗体、基因缺失 和标记疫苗的靶抗原、细菌毒素抗体的方法，可以排除疫苗抗体的干扰，能判断 动物是否感染过该病。例如口蹄疫病毒非结构蛋EtELISA抗体检测，可以区分口 蹄疫灭活疫苗接种的动物和病毒感染动物。 对于接种活疫苗的群体，如果接种的是基因缺失或标记疫苗，可以用相应的 检测试剂作鉴别检测，比如伪狂犬的gpI抗体检测；也可以寻找活疫苗与野毒株 的抗原差异，研究相应的鉴别检测方法，如猪瘟强弱毒抗体的鉴别检测，就是依 靠特异性单克隆抗体介导的。 (二)检测病原微生物的抗原和药物残留 竞争ELISA、免疫胶体金等，可以判断动物是否携带或排出病原体。目前仅有少 数检测抗原的方法可供使用，如猪瘟抗原检i贝IJELISA和沙门氏菌快速检NELISA 等，用于检测残留药物