烟草制丝过程中游离氨基酸的变化的研究.pdfVIP

烟草制丝过程中游离氨基酸的变化研究 赖伟玲 刘江生 （龙岩卷烟厂，福建省龙岩市乘风路1299 号 364021） 摘 要：超声波水解提取烟叶中的游离氨基酸、AccQ-2A 氨基酸衍生化试剂衍生化、反相高效 液相色谱法测定卷烟制丝过程中松片回潮、润叶加料、烘丝三个工序前后烟丝中的游离氨基酸。 结果表明：制丝加工制丝过程中A、B 两个不同牌号的16 种游离氨基酸总量增加，幅度分别达 32.5%和22.1%。 关键词：烟草 游离氨基酸 反相高效液相色谱法 氨基酸是烟草中的一类重要化学物质，烟草中的游离氨基酸在烟叶的烘烤、陈化、调制及 抽吸过程中均会与烟叶中的还原糖发生非酶棕色化反应，生成吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂 环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等[1]。其数 量的多少和质量的高低会直接影响烟叶的内在品质，所以研究烟叶在不同加工处理过程中游离 氨基酸的种类和数量的多少及相对变化对于指导烟叶加工工艺，提高烟叶的内在品质都有着重 要的意义[2]。本实验采用反相高效液相色谱法对烘丝工序前后的游离氨基酸进行了定性定量分 析，为卷烟配方和加工工艺参数的优化提供理论依据。 1 实验 1.1 材料与仪器 材料：卷烟加工过程松片回潮、润叶加料、烘丝三个工序前后的A、B 两个不同牌号的卷 烟烟叶或烟丝样品 试剂：Waters AccQ-Tag 流动相A 浓液；Waters AccQ-Fluor 试剂盒（包括硼酸缓冲液1、 衍生剂粉2A）；乙腈（HPLC 级）；正缬氨酸（内标）；氨基酸标标准样品：天冬氨酸、谷氨酸、 丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、半光氨酸、缬氨酸、赖氨酸、 苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸u）和脯氨酸，均为生化试剂。 仪器：液相色谱仪（带荧光检测器和自动进样器）；超声波发生器（57X 型，NEY 公司） 1.2 色谱条件 液相色谱柱：AccQ-Tag 氨基酸分析柱（3.9×150mm，4um） 流动相A：Waters AccQ-Tag 流动相A 浓液按1：10 稀释，B：乙腈，C：超纯水 恒流流速：1.0ml/min 柱温：37℃ 进样量：3.0 μl 荧光检测波长：激发波长250nm，发射波长395nm 淋洗梯度：见下表 表1 流动相的淋洗梯度表 序列 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 流动相C/% 流速/ （ml/min） 1 0.00 100 0 0 1.0 2 0.50 99 1 0 1.0 3 18.00 95 5 0 1.0 4 19.00 91 9 0 1.0 5 29.50 83 17 0 1.0 6 35.00 0 60 40 1.0 7 38.00 100 0 0 1.0 8 47.00 100 0 0 1.0 1.3 样品处理 将烟叶在烘箱中恒温40℃烘干至恒重，粉碎，过40 目筛，筛下物为实验用烟样粉末，置 于广口瓶中备用。准确称取1.000g 烟末于50ml 锥形瓶中，加入200 μl0.1mg/ml 的内标溶液和 50ml 的超纯水，室温下超声振荡萃取60min，过滤。取过0.45 μm 滤膜的滤液50 μl 于水解管中， 加入70 μlAccQ-1 衍生化缓冲溶液，涡旋搅拌器震荡10 秒，边震荡边加入20 μlAccQ-2A 氨基酸 衍生化试剂，加完震荡10 秒，置55℃的烘箱衍生化反应10min 后取出。将水解管中的溶液转 移至微量色谱管中，置液相色谱瓶中进行HPLC 分析。 1.4 氨基酸的定性与定量分析