NDV本地分离株和疫苗株(Lasota)抗原交叉性研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 NDV本地分离株与疫苗株(1asota)抗原交叉性研究 顾万军，黄良宗，王淑敏，冼琼珍，麦根沛，陈建红 (佛山科学技术学院，预防兽医研究室，广东佛山南海大沥，52 8 2 31) 鸡新城疫俗称鸡瘟，于1926年首先发现于印度尼西亚的巴塔维亚，同年发现于新城，故名为新城 疫。本病的死亡率极高，强毒力毒株引起的感染常达100％，广泛分布于世界许多国家。新城疫 (Newcastle (OIE)和我国动植物检验检疫局将新城疫列为A类传染病，是危害养禽业的最重要疫病之一。 鸡新城疫病毒只有一个血清型，但存在毒力差异悬殊的不同毒株，从分子流行病学角度可分为九个 基因型。新城疫流行已有七十多年，30—50年代的大流行，主要由基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型毒株所致；60年代 大流行，主要由基因Ⅵ型毒株所致；90年代的大流行主要由基因Ⅵ、Ⅶ型毒株所致，尤其是93年以后 多由基因Ⅶ型毒株所致，并一直流行至今。新城疫分子流行病学的研究表明，新城疫的世界大流行与病 毒的变异有着直接的联系，每次流行都有新基因型的出现，近年来我国流行主要是基因Ⅶ、Ⅸ和Ⅳ型引 起的，其中基因Ⅶ型是最主要的流行株。 国内有报道，NDV抗原性发生了变异，用常规Ⅳ系疫苗株(基因Ⅲ型)与分离强毒株之间得不到完 全保护。究竟本地区的情况如何?Ⅳ系疫苗株lasota免疫鸡后对以上三种强毒株攻击的免疫保护如何? 的抗原交叉性，为制定新城疫的防制措施提供科学依据。 1、材料 I．1实验动物 非免疫小鸡1天龄(34只)购于佛山市燎原种鸡场 1．2病毒 基因Ⅶ型：NDV—NH属于基因Ⅸ型：Lasota、F48E9标准毒株购于中国兽药监察所。 1．3试剂盒 Ls RNAIsolation RNA抽提试剂盒(TRIzolReagent)：Total RT—PCR试剂盒Invitrogen公司产品 GelExtraction PCR产物胶回收试剂盒(E．z．N．A Kit)Promega公司产品 2、方法 2．1抗原交叉性分析 2．1．1病毒增殖 亡的鸡胚尿囊液。 2．1．2 HA试验 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 稀释度 1：2 i：4 1：8 1： 1： 1： 1： 1： 1： 1： 1： 16 32 64 12825651210242048 生理盐水 2弋2＼ 4单位抗 嗲入2小 口 弋吵 。” ：疆 原 25 25 》贴 入。 》弱 。． 5 入。 父。 25 1％红细胞 N一 孙 口一 2．1．3四单位抗原的制备 根据抗原的HA价，需用HA价除以4即得出抗原原液需要稀释的倍数，于实验前准备。 2．I．4交叉HI试验 E 用抗Lasota血清对Lasota毒株、F。8 HI试验。 红细胞凝集抑制试验术式(单位：u1)见表二 材 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 料 稀释 1：2 1：4 1：8 1： 1： 1： 1： 1； 1 1： 1： 度 16 32 64 128 256512 生理盐水 5＼25＼25 22 待测血清 i处5。2入5-2入5：×》：》i∥～2s／卜。A2亨～≥港 4单位抗原 25 25 25 2