朱鹮卫星DNA遗传多态性的研究.pdfVIP

塞盘盆壬遗僮燕苤塑左羹I_501 朱鹩卫星DNA遗传多态性研究+ 张永德1 雷初朝1 陈宏¨ 刘津1 蓝贤勇1 范光丽懈 (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨陵，712100 2．徐州师范大学生物技术研究所，江苏徐州，221009) 摘要本文利用其它物种的22对微卫星引物对30只人工饲养朱鹞的DNA多态性进行检测， 共筛选出4对微卫星引物，扩增出13个等位基因。这4对微卫星位点的平均杂合度为0．3760，表明朱 鹑人工饲养种群的DNA具有一定的遗传多态性，但仍然比较贫乏。 关键词朱鸦；微卫星DNA；多态性 朱鹃(NipponiaNippon)属于国家一级保护动物，世界濒危物种。经过广大科研人员20余年的努 力，现在其种群数量已由1981年重新发现的7只…发展到近400只，濒危程度得到一定程度的缓解。 但是由于该物种是由极少的建群者发展而来的，因此其种群的亲缘关系一定较近。频繁的近交导致朱 鹛种群及其后代生存能力大幅度下降的现象已经发现”o。为了防止近交衰退，保证人工饲养和野生种 群的正常生长、发育、繁殖和快速扩群，研究朱鹃的遗传背景及其遗传多态性的工作迫在眉睫。 本次试验是在第一代分子标记技术一RAPD标记对朱鹃进行亲缘关系研究的基础上，探索利用其 它近缘物种已知微卫星引物作为标记来研究朱鹃的遗传多态性。范光丽”1、刘斌”。、李军林”。等分别 利用RAPD标记技术对朱鹃进行了亲缘关系鉴定。但是鉴于RAPD重复性低，稳定性较差，并且对其特 异性也一直存在争论。因此有必要采用更为精确、特异性更强的分子标记方法一微卫星标记对朱鹏的 遗传多态性进行研究，以期利用微卫星数量多、分布广、片段小、实验方法灵活、易操作等优点来研究朱 鹃群体的亲缘关系，为朱鹃个体提供清晰精确的遗传背景。本试验对朱鹃的微卫星标记研究进行了初 步的探索。 1材料与方法 1．1实验材料 从陕西省洋县朱鹃保护站随机选择人工饲养的30只朱鹃，采集肱静脉血液1．5ml，加入0．2％肝 素钠抗凝，分装编号后置于一20℃～一86qc保存。 1．2实验方法 1．2．1全血基因组DNA的提取按常规的酚一氯仿法提取。 1，2．2微卫星引物的筛选由于目前尚未有关朱鹪微卫星研究的报道，更没有朱鹛微卫星序列的相关 信息，所以本实验尝试利用其它物种已知的22对微卫星引物对30个血样进行PCR扩增。经过筛选， 发现4对微卫星引物扩增出多态性产物。 1．2．3徽卫星位点的检测按常规的聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染法检测电泳结果。 1．2．4微卫星DNA片段大小的确定利用KodakDCl20成像系统判别微卫星等位基因的大小。 1．3微卫星位点的数据处理 见Nei‘6’和Bostein的报道‘”。 ●基金项目：国家自然科学基金(N“3007093)．陕西省自然科学基金(Nn2001SMl4)资助。 作者简介：张永德(1977一)，男，山东潍坊人，硕士研究生，从事神经生物学研究。 黼通讯作者：范光丽(1943一)，女，山西太原人，教授，博士生导师，E．mail：guaaglifaa@yahoo．com．∞ 502_l生冒动擅遗佳壹弛班窟进匮 2结果 4个微卫星基因座在朱鹧群体中共检测出13个等位基因，在位点HELl检测到7个等位基因，变异 提出了衡量基因变异程度高低的多态信息含量指标，当P，c为0．5时，该基因座为多态基因座；当PIC 为0．25时，为低度多态信息含量；当处于两者之间时，为中度多态基因座”’，由此可见，我们所筛选出的 微卫星基因座只有HELl为高度多态性基因座，其余为中低度多态性基因座。 裹1 4个微卫星DNA基因座的遗传学信息 圈1豫卫星基因座HELl扩增结果 3讨论 3．1 关于微卫星引物的筛选 微卫星是一种具有较大应用价值的分子标记技术，从一个物种产生的微卫星引物可以应用于相关 物种的研究，Saitbekova等”。利用牛的20个微卫星位点在瑞士山羊中扩增后，表明所有的瑞士山羊都具 有较近的亲缘关系。我们经过对22对微卫星引物筛选，发现只有4对引物具有多态性扩增产物。一个 可能的原因是物种之间微卫星DNA所在区域在生物的基因组中是比较保守的，另一个原因是鸟类微卫 星位点密度相对较小，平均每3lkb才