基于actA基因的产单核细胞李斯特菌遗传谱系的研究.pdfVIP

人畜共总传染病防治研究新成果汇编 基于actA基因的产单核细胞李斯特菌遗传谱系研究 周晓辉 焦新安 (扬州大学生物科学与技术学院， 扬州， 江苏， 225009) 可能性，及中国与美国的Lm分离株遗传进化的关系。方法采用特异性引物扩增40株食品及临床分离株 的actA基因型； 离株与美国分离株的谱系相一致，在40株中国分离株中有14个actA基因型，其中有两个与美国分离株 株具有较大的相似性，Lm的克隆组群可能在全球范围内存在。 【关键词】actA基因；遗传谱系；产单核细胞李斯特菌 产单核细胞李斯特菌(Listeia System)，并 分Lm的敏感性较强，并被认为是分子亚型分析的金标准，然而，有时候，PFGE可检测出一些在流行病 学上无意义的基因结构差异”l。另外这些依赖于DNA片段大小的亚分型方法不利于标准化和实验室间的 数据交换。 基于DNA序列的亚型分析和遗传谱系研究已被广泛应用。。Lm的actA基因对其致病作用是必须的， 为14actA基因型．显示其具有较高的分型能力。基于上述研究结果，我们认为actA基因3’末端的核苷酸 序列可能是Lm遗传进化与谱系分析的一个有效的后选基因。因此，本研究比较分析了40株中国食品与 I临床Lm分离株actA基因3，末端的核苷酸序列，并根据这些序列构建了Lm中国分离株的遗传进化树， 并通过与15株美国分离株序列相比较，以获得中国和美国Lm分离株遗传进化的关系。 1 材料与方法 Lm菌株：40株Lm菌株分离自各类食品以及李斯特菌病患者的脑脊液。所有菌株都经PCR鉴定证实， 详见表1(略)．本文所使用的美国分离株序列见表2(略)． 人畜兆忠传染病防治研究新成果汇编 引物由宝生物大连工程分公司合成。PCR反应体系为100Ⅱl，其中IOxPCR缓冲液10 最后转为4℃保存。 uI PCR产物的序列测定：取10 PCR扩增产物在1．5％琼脂糖凝胶电泳后在紫外线下观察，以确认扩增条带 的正确性。其余的PCR扩增产物由宝生物大连工程分公司纯化后测序，采取正反双向测序，以确保测序的 准确性。 2 结果 2．1 Lm中国分离株的遗传进化与谱系分析 分别称为遗传谱系I(Lineage 谱系I和谱系II，其中有lo株属于谱系I，12株属于谱系II。 2．2中国与美国Lm分离株遗传谱系与actA基因型比较 从图1可知，所有谱系I的中国菌株和美国菌株处于同一个遗传谱系，同样所有谱系Ⅱ的中国菌株和美国 菌株也处于同一个遗传谱系。没有发现与谱系Ⅲ美国分离株相一致的中国分离株。在谱系II中，美国分离 Jl一022，和FSLJ2-017属于距群IIA。 J1．047，FSL 株中也存在亚群IIA和亚群IIB的菌株，其中。FSL FSLJ2．003和FSL 了基于蛋白质序列的遗传进化树，其结果与基于核苷酸序列的遗传进化树一致(图未显示)。在40株中国 分离株中发现14个actA基因型(表1)(略)，其中两个lineage 现在中国和美国分离株中。 2．3Lm中国分离株与美国分离株actA基因3’末段核营酸序列与蛋白质序列的变化 行了谱系内和谱系问的同源性比较。所有谱系ⅡB亚群菌株actA基因核苷酸序列的同源性为 菌株的同源性要低，为90．8％~99．7％。不同谱系闯菌株actA基因核苷酸序列的同源性比较见表3。 的同源性见表3。各谱系问保守氨基酸的变化见袁4。 —— 查蔓苎璺些墨堑堕塑墅塑堑壁墨至塑 表3不同谱系问菌株actA基因核苷酸和蛋白质序列的同源性比较 注：黑体为蛋白质序列同源性 表4各谱系问菌株AetA蛋白质一致性氨基酸的变化 4Aminoacidresiduesthat differbetween Table