中华猕猴桃多糖在DEAE+Sepharose+FF上的吸附分离的研究.pdfVIP

中华称猴桃多糖在DEAESepharoseFF上的 吸附分离研究 张 良 姚善汪 (浙江大学化学工程与生物工程学系，杭州310027 摘要 中华琳报桃多粉是具有多种生物学功能的免疚调节别，具有广泛的应用前景。本文研究了中华 称很桃多粉在离子交换树脂DEAESepharoaeFF上的吸附和洗脱行为，发现城性声条件有利于多格的 吸附，翎故盐坎冲液由于可以和多掩形成络合阴离子，因而提高了树脂的吸附容1，且利用绷故级冲 液可以对吸附多柑进行部分洗脱分离。 关.词 多粉 离子交换 纷报桃 吸附 近年来，从各种植物中分离活性多糖的研究正日益成为热点hl，但是由于多搪类物质自身特 有的结构特点，多糖类物质的分离纯化和分离过程中的在线检测一直成为难以克服的问题。琳 猴桃中的多搪是具有多种生物功能和免疫促进活性的一类多糖物质。前人的研究表明中华赫猴 桃多糖是一种有效的免疫调节剂，具有抑止小鼠肿瘤细胞131、增强天然杀伤细胞功能141、抗感染 免疫151和调节T淋巴细胞系统的作用[61，有着广泛的应用前景。 我们曾以中华琳猴桃果为原料，经匀浆、热水抽提、除杂、除蛋白、浓缩后，获得了琳猴桃果粗 多糖，然后再经离子交换层析和凝胶层析得到了三种多糖。本文将主要报道在离子交换层析中出现的 一些基本问题，考察了不同缓冲体系下，中华称猴桃粗多糖在DEAESepharoseFF上的吸附和洗脱情 况，讨论了不同的缓冲体系中，不同pH条件、不同缓冲液浓度下多糖的吸附和洗脱。 1材料和方法 1.1材料与试荆 中华赫猴桃果中粗多糖为实验室制得;XK16柱为。mesh- enpharmacia公司产品;国产721分光光度计;DEAE一Sephrose 一FF为AmemhenPharmacia产品;Long一Pump1515easy恒流泵 为兰格恒流泵有限公司产品;其余实验化学试剂为国产分析 纯。 1.2 实脸装I 离子交换实验的设备装置如图1所示 1.3 实脸方法 在XK16/20柱中装人一定体积的DEAESepharoseFF，用上 圈1 离子交换层析操作圈 样缓冲液充分平衡;称猴桃多糖粗品经由同样的缓冲液溶解 1一样品液 2一级动泵 后，上样。以试管分布收集穿透液，待样液完全穿透后停止上 3-凝胶 4一分布收集器 样，以缓冲液充分冲洗除去未吸附的多糖，再用洗脱液洗脱， 分布收集洗脱液，并用硫酸一苯酚法测定其中的糖浓。 分别配制pH为6.0,7.0,8.0，浓度为。.lmol/L的磷酸缓冲液 (PBS,pH为7.4,8.0, 8.4)，浓度为0.lmol/L的翻酸缓冲液，进行上样实验，上样流速1.25ml/min，分布取样侧定多糖 的穿透曲线。 配制0.2mol/LNaCl溶液，0.2mol/L(NH4)2504溶液)对吸附于DEAESepharoseFF上的多糖 进行了洗脱实验，洗脱流速为0.42ml/min，分布收集洗脱液，以硫酸一苯酚法测定其中的糖浓。 545 随后以0.60mol/L的洗脱液再次洗脱测定收集液糖浓。 2 结果与讨论 2.1不同pH条件下多糖的吸附性能。 图2,3所示为不同的pH的PBS缓冲液条件和硼酸缓冲液条件下，多搪在DEAESepharoseFF F的穿透曲线。 O 7 朗 吐 J Q