传染性喉气管炎病毒gB、gC、gD基因免疫地研究.pdfVIP

主墼查丝量垂芏量童煎生壁盒蔓±壅芏查煎盟塞造塞墨 传染性喉气管炎病毒gB、gC、gD基因免疫的研究 孟松树张绍杰郭鑫童光志 (中国农业科学院哈尔滨兽压研兜所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨15000】) 摘要本研究探讨了lLTv基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTv王岗株gB、gc、 gD的真揍表达质粒单独或联合免疫sPF鸡，以MTT法检测娉胸腺、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原conA、PMA刺 激后的增殖反应活性+以间接ELlsA法捡测血清抗体水平。结果表明，ILTv基因免疫诱导机体产生了较强的淋巴 细胞增殖反应。血清抗体在免疫后第2周发生阳转，而对照组无相应变化．这是ILTV基因免疫研究的首次报道。 关■诃f传染性喉气管炎病毒gB、gc、g功基因免症 、 ，’ n 鸡传染性喉气管炎(1LT)是鸡的一种急性上呼吸道传染病，其病原为传染性喉气管炎病毒 (ILTV)，该病可造成鸡的死亡及产蛋下降。自l925年美国报道本病以来，本病已经是世界范围内 流行的危害养禽业的重要疫病之一，我国于50年代发现有本病的存在。目前ILT的防制除采取综 合性预防措施外，主要依靠接种减毒疫苗．但减毒疫苗存在毒力偏强、易于返祖、并且与强毒株一样 能形成潜伏感染等弊端，因此有必要研制新型疫苗以满足ILT防制的需要。目前ILTV新型疫苗 的研制主要集中于TK基因缺失疫苗、重组病毒活载体疫苗及基因疫苗。TK基困缺失疫苗的毒力 虽然减弱，但仍有产生潜伏感染及体内重组的可能，活载体疫苗排除了潜伏感染的可能，但存在着 宿主对载体本身免疫的限制，通常不能进行多次免疫接种，而DNA疫苗作为第三代疫苗，因其既 有亚单位疫苗的安全性，又有减毒活疫苗的有效性而受到研究人员的瞩目。 DNA疫苗是近年来发展起来的一种新型疫苗，它通常是指表达某种抗原基目的真核表达质 粒，以这种真核表达质粒直接免疫动物，质粒可在动物体内表达抗原蛋白，诱导机体产生针对该抗 原的免疫应答，此种免疫方式称为基因免疫或DNA免疫o]。目前基因免疫已经成为国际疫苗研究 领域中的热点，并已在多种人和动物的传染病、寄生虫病、抗肿瘤等方面取得进展，一些DNA疫苗 已进入临床试验。在禽病防制研究领域，国内外许多学者对AI、NDV、IBV、IBDV等的基因免疫进 行了探讨“。】，取得了一定进展，而对ILTV基因免疫的研究且前尚未报道，鉴于ILTV gB、gc、gD 在诱导机体免疫应答方面的作用，本研究将分别构建的表达ILTv王岗株gB、gc、gD基因的真核 表达质粒(PgB、Pgc、PgD)直接肌肉注射sPF鸡，通过淋巴细胞转化试验和血清抗体检测，分析了 ILTV基因免疫所诱导的细胞和体液免疫应答的动态变化，结果表明，ILTV基因免疫诱导免疫鸡 产生了较强的细胞和体液免疫应答，这就为ILTV的防制开辟了新的途径。 l材料与方法 1．1 实验动物 1日龄sPF鸡由本所sPF实验动物中心提供，实验期间饲养于隔离器中。 1．2病毒ILTv减毒疫苗购自英特威公司北京办事处，批号：95026B PgD由作者自行I訇建。 1．4 主要试剂 Ac一 刀豆蛋白A(concanavaIinA，conA)，乙酸豆寇佛渡醇(PhorbalMyristate ～143— 生垦查堑璺堕芏童苎煎呈堑垒蔓±选生垄蟹过童堡皇塞 z01iumbramide， MTT)为signu产品．RPMIl 上海华舜生物公司，其它常规试剂为进口或国产分析纯。 1．5实验动物分组及免疫 次免疫，剂量100(g／只，四点小腿肌肉注射，五周龄时进行第二次免疫，剂量不变，E组中PgB、 射生理盐水，减毒疫苗组(B组)鸡五周龄时按说明书滴眼接种。 1．6样品采集 免疫后每周每组取1只鸡，颈动脉放血致死，无菌采集胸腺、法氏囊。另外每组每周翅静脉采血