硒对苯并%5ba%5d芘诱导的小鼠肺细胞DNA损伤的作用的研究.pdfVIP

288 硒对苯并F-a]芘诱导的小鼠肺细胞DNA 损伤的作用研究 余日安鲁文清 (华中科技大学同济医学院公共卫生学院，430030) 【摘要】 目的：研究亚硒酸钠对苯并[a]芘(B[a]P)诱导的小鼠肺细胞DNA损伤的影响。方法：选用 雄性昆明种小鼠。亚硒酸钠采用腹腔注射染毒，B[a]P灌胃染毒。B[a]P单独作用的剂量是125、250和 合染毒。设立溶剂对照组。用单细胞凝胶电泳方法检测DNA损伤。结果：125、250和500mg／kgB[-a]P组 小鼠肺细胞DNA损伤程度较对照组严重(P0．01)。总损伤细胞百分率较对照组显著增高(P0．01)， 肺细胞DNA损伤具有明显的拮抗效应，1．5mg／kg亚硒酸钠的拮抗作用优于0．75和3．0mg／kg的亚硒 的亚硒酸钠对250mg／kgB[a]P诱导的小鼠肺细胞DNA损伤具有明显拮抗作用。 【关键词】硒苯并[a]芘DNA损伤 [a]P的致癌作用在分子水平上展开了广泛的研究。研究表明，一定剂量的B[a]P能引起人脐静脉内 diol (benzo(a)pyrene epoxide)诱导的DNA损伤与肺癌的危险性具有明显的剂量一反应关系。由此 可见，B[a]P的致癌效应与DNA损伤密切相关。硒作为机体必需的微量元素，对B[a]P诱导肺部肿 瘤的发生有明显的抑制作用[4]。我们也曾研究表明，硒对镉诱导的大鼠肝细胞DNA损伤具有明显的 拮抗作用[5]。为了进一步阐明硒拮抗B[a]P致癌作用的机理，我们采用单细胞凝胶电泳技术研究亚 硒酸钠对B[a]P诱导的小鼠肺细胞DNA损伤的影响。 1材料与方法 1．1实验动物及分组：健康雄性昆明种纯系小鼠，由华中科技大学同济实验动物中心提供，体重 组腹腔注射PBS，每天1次，连续3d后再用DMSO灌胃。灌胃后3h将动物处死，取出肺脏。 1．2肺细胞分离：颈椎脱臼法处死动物，立即取出肺脏，用冰冷的磷酸盐缓冲液(PBS)清洗，去 除血迹后置于两块磨砂玻片间磨取细胞，然后用冰冷的PBS液润洗玻片，110目分子筛滤过后，600～ 胞／ml，计算细胞存活率(要求细胞存活率95％)。避光保存于4℃，待测。 硒对苯并[a]芘诱导的小鼠肺细胞DNA损伤的作用研究 289 1．3单细胞凝胶电泳：单细胞凝胶电泳参照文献方法吲，其操作程序如下：电泳后取出玻片，用 片。在荧光显微镜下，每只动物观察计数100个细胞，根据拖尾中DNA的量占细胞总DNA的比例， 将DNA损伤程度分为5级。0级：无损伤(正常细胞)，5％；1级：低度损伤，5％～20％；2级：中度损 伤·21％～40％；3级；高度损伤，41％～95％；4级：重度损伤，95％。将总损伤细胞合并计算总损伤 细胞百分率。 1．4资料统计分析方法：用SAS8．1软件进行统计分析。组问比较用X2检验，并采用Ridit检验 分析各实验组与对照组总损伤细胞百分率。 2 结果 2．1 的小鼠肺细胞DNA损伤总损伤细胞百分率，较对照组显著增高，运用Ridit检验，亦表明总损伤细胞 百分率与对照组相比具有显著性差异(Po．05)。以总损伤细胞百分率为纵坐标，B[a]P的剂量为横 坐标，剂量一反应关系曲线呈抛物线型。将剂量换算成对数，计算直线相关系数r=0．9525(PO． 01)，表明B[aJP引起的小鼠肺细胞DNA损伤存在着明显的剂量一反应关系。结果见表1。 表1 B[a-]P对小鼠肺细胞DNA损伤的影响 2．2 注：运用F检验，*与对照组比较PO．Ol；运用Ridit检验，▲与对照组比较P0．05。亚硒酸钠对B[a]P诱 说明虽产生抑制作用，但并不是完全抑制，而中硒+B[a]P组的总损伤细胞百分率与对照组比较却无 显著性差异。所以，硒对B[a]P诱导小鼠肺细胞DNA损伤虽然具有显著的拮抗作用。但在具体的拮 抗模式上，各剂量组还有不同。 在硒与B[a]P联合作用的3个剂量组之间，中硒+B[a]P组的总损伤细胞百分率最低。显著低 kg，提示在1．5mg／kg左右可能存在着亚硒酸钠的最佳拮抗剂量。结果见表2。 衰2