2008～2009年西南地区规模化猪场病原菌分离及耐药性调查.pdfVIP

猪的传染病一猪细菌病 2008～2009年西南地区规模化猪场病原菌分离及耐药性调查 曾博王红宁+邹立扣 高荣张安云杨鑫周英顺徐昌文 (四川大学生命科学学院，四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”，四川成都610064) 捕要本实验室对西南地区47个不同规模化猪场的364份病料进行细菌分离，并采用形态、显微观察结合16s rDNA PcR扩增测序鉴定菌株；共检出细菌509株，细菌分离率达84．3％，混合感染率为37．4％；主要病原为大肠杆 小鼠致病性实验结果显示平均致死率高达37．3％。191株致病菌株的药敏试验显示p一内酰胺酶抑制剂药物(AMC， 六重耐药为主。 关键词规模化猪场；细菌；致病性；药敏实验 细菌性疾病一直以来是规模化猪场疾病防控的重点，2005年网川爆发猪链球菌事件，2006年全 国再次爆发猪高热病，造成的损失巨大。调查表明，直接或继发细菌感染是临床发病和死亡高的重 要因素，这迫使对规模化猪场细菌性疾病的防控需求加强。目前对规模化猪场单一疾病的调查研究 较多，以大肠杆菌为指标菌作的耐药性调查研究较多，但较全面的病原菌检测和耐药性研究较少。 为了更全面地掌握西南地Ⅸ规模化猪场病原菌流行情况和耐药情况，本研究对2008～2009年间西南 地区的病样进行了病原菌的分离鉴定、致病性实验和药敏实验，现报告如下。 1材料与方法 1．1主要试剂 ． 科技有限公司；药敏纸片购自广州迪景微生物科技有限公司，PcR引物由上海生工合成；GoldView Marker 染料、琼脂糖、DNA 2000购自成都飞克(天泰)生物科技有限公司。 1．2细营分离纯化 病料样本来源为刚死亡病猪，濒死猪和已解剖取样后的脏器组织，取样部位为心、心包积液、 胸腔积液、肺、肝、脾、。肾、淋巴结、胆囊、十二指肠等。用无菌棉拭子蘸取组织液，接TSA血平 37℃培养，菌落生长后着重选优势菌 板、巧克力琼脂(含NAD和酵母浸膏)、麦康凯和SS琼脂， 落，进行l到2次划线纯化细菌。 1．3细菌鉴定 1．3．1苗落形态特征观察 对大小、形状、颜色、光滑粗糙与否、扩散与否，溶血与否等基本性状进行区分，并单独划线 纯化，革兰氏染色后显微观察。 1．3．21 6S rDNA序列分析 l％的琼脂糖凝胶电泳检测。获取1400bp左右的目标片段后，PCR产物送上海生工生物工程有限公 菌。 1．4致病性试验 将纯化菌落用生理盐水稀释至5．O×108CFU／IIll，0．5rnl腹腔注射小白鼠，观察3天，剖检死亡 小鼠，取心血、肝脏划线培养，革兰氏染色观察，并与初始培养细菌信息对照，确定菌株致病性。 第十三次学术研讨会会议论文集 1．5药敏实验 实验莺点选取致病菌株和具有地方代表性的典型菌株进行药敏试验，按照CLSI推荐的K．B法 进行。根据NCcLS(2006)的标准判定其耐药性。药敏使用抗生素种类见表l。 2结果与分析 2．1细菌检验和致病性结果 本实验窜在2008年到2009年间对西南地区(四川、重庆、云南、河南省)47个大、中、小型 规模化猪场送来的364份病样进行细菌分离，307份病样检出细菌，分离率达84．3％，其中115份 病样检测出1种以上细菌，混合感染率为37．4％。实验共分到细菌509株，病原菌检出分布和致病 性试验结果见表l。 表1病原菌检出分布和致病性试验结果 检{{{病原菌主要有大肠杆菌、葡萄球菌、肠球菌、肺炎克雷伯氏杆菌、变形杆菌、链球菌(表 菌(25．1％)。 大肠杆菌多分离自心、脾脏、肾脏和淋巴结，占30．4％，小鼠致死率高达56．4％。葡萄球菌占 21．6％，主要有猪葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、产色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、缓 慢葡萄球菌、表皮葡萄球菌，致死率较低(19％)。链球菌主要为猪链球菌和猪肺炎链球菌(5．9％)， 致死率高达66．6％。肠球菌有粪肠球菌和屎肠球菌，占11．4％，致死率低(10．3％)。肺炎克雷伯氏 杆菌(8．7％)检出率和致死率(31．8％)都较高。变形杆菌主要是奇异变形杆菌(8．5％)，致死率