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广西师范大学学报(自然科学版)‘ JOURNAI，OFGUANGXINORMALUNIVERSITY V01．21No．4 一种基于抗体自身的巯基与金作用的定向 固定化方法的研究 王桦，沈国励。，俞汝勤 湖南大学化学化工学院，化学／生物传感与计量学国家重点实验室．湖南长沙410082) 免疫传感器的传感特性常决定于免疫活性物质的固定化方法…．抗体的定向固定化有利于充分发挥 抗体的活性“一．本文提出了一种基于抗体自身的巯基与金作用的定向固定化方法用于压电免疫传感器中 的Fab片段”一，通过巯基与金之间的共价键合作用，直接将之固定于晶振的金电极表面，用于定量检测人 血清中B因子．实验考察了抗体的还原及其产物Fab片段的固定化条件．将本固定化方法与传统的蛋白 A吸附固定法和直接的金电极吸附固定法进行比较，发现本方法固定的抗体片段具有分子密度较大、稳定 性较高和免疫活性较强等优点． 1实验部分(略) 2结果与讨论 2．1 Fab片段的定向吸附固定化 抗体分子的两条重链间以二硫键相连，可采用温和的还原剂，如巯基乙胺(2MEA)，将之还原成两个 350 300 250 毒200 q 50 100 50 0 0 20 40 60 R0 100 120 Conentratc n ofBtbctor／(nlg fortile withtheFab re(1)．the Aprocedure(2)andthedirect l Calibrationprofiles cryslals procedu protein Fig goldprocedure(3) 基金项目：国家自然科学基金资助项目29975006) 作者钧介：沈国励(1938一)．男，教授研究方向：化学与生物传感器．电话：0731—8821 第21卷 广西师范大学学报(自然科学版) 107 之间的强共价键合作用固定于金电极表面，其结合抗原的活性部位一端则向外伸人溶液与抗原发生免疫 反应．结果表明，采用该方法固定的Fab片段，其分子密度，稳定性和免疫活性均高于完整的抗体分子． 2．2不同固定化方法的比较 测下限(直线与x轴交点)较低，检测的灵敏度(直线斜率)较高． 2．3抗体分子的还原和固定化 结果表明，2MEA浓度约为3 的．同时，抗体还原的最佳pH值为6．5，最佳温育时间为45 时，免疫反应的响应频移值最大． 2．4 B因子的检测 现B因子浓度在0．75～9．34 mol／I．范围内与响应频移值成线性关系．对浓度为71．0mg／l。的B因子血 清重复测定8次，得到响应频移值为：262±27Hz，相对标准偏差为10．31％． 4结论 本文研究了定向吸附固定抗体Fab片段于金电极表面的可行性和优越性．与传统固定化方法比较， 本方法所固定的抗体片段具有分子密度大、稳定性高和免疫活性强等优点，研制的B因子传感器的响应 性能得到了明显的改善．特别是，该抗体固定化方法不仅适于镀金电极的压电免疫传感器，而且其它以金 为基底的传感器，如电化学、光化学(表面等离子体共振)等传感器，均可采用此方法进行抗体的固定化．因 而具有较强的普适性． 参考文献 RL．JarviEJ，RosentreterJ J Talanta，1998．46：I236 [1]Bunde 223一i M