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血红蛋白作为过氧化物模拟酶的电化学分析法的研究 孙伟焦奎王海玉 (青岛科技大学化学与分子工程学院，青岛，266042) 血红蛋白(Hb)是一种重要的蛋白质，对lIb的测定是临床检测的一个重要内容。Ilb是 由四条肽链聚集而成，每条链上有一个亚铁血红素，在生物体内具有传递电子、输送氧气等 功能。近年来人们对髓的电化学分析研究主要集中于它在各种修饰电极上的直接电化学行为 以解释电子的传递过程，但对其酶催化反应的特性研究不多。}Ib具有和辣根过氧化物酶(HRP) 相同的铁卟啉辅基，可作为HRP模拟酶，具有催化特性稳定的特点。本文探讨了IIb作为HRP 模拟酶对邻联茴香胺(ODA)一112m反应体系的催化特性，建立了以ODA为底物线性扫描二阶导 数极谱法测定IIb的新方法，对llb检测的线性范围为2．OX101—2．0×10～mol／L．检测限为 1．OXl01 mol／L。 所有的实验工作在JP一303型极谱仪(成都仪器厂)上进行，常规三电极系统：滴汞电 极为工作电极，饱和甘汞电极(SCE)为参比电极，铂丝电极为对电极。 1．Hb模拟酶催化反应体系的线性扫描二阶导数极谱图 mol／L 在10札比色管中依次加入1．0×10-2ODA溶液2．0mL,1．0×10-3mol／L11202溶液 mol／LpH 4．0mL，0．2 mL 掘L，在50℃的水浴中反应30min后取出。移取5．0瑚L反应液，加入1．5pl{8．0的B-R 缓冲液，定容到10．0mL后在JP-303型极谱分析仪上记录产物的线性扫描二阶导数极谱曲线， 结果如图l所示． 曲线l为反应步骤中仅有磷酸盐缓冲液的情 况，没有极谱波：曲线2为磷酸盐缓冲液+ODA+H如 的情况，在一0．56V处有一极小的极谱波，这是由 于Hz吼对ODA的缓慢氧化及方法的高灵敏度而产生 的空白波；曲线3为上面溶液中加入IIb的情况， 由于l{b的加入，极大地催化了H如氧化OBA的反 应，因而其反应产物在-0．56 v产生了一个大的峰 形良好的极谱波。应用此波可以测定游离曲，进 而可用于人血清样品中Hb含量的测定。 图1肪一0D^斗b幔催化反应体系的典型线性扫描极谱图 1．iOi#04-NalliPO,buffer 2．1+2．0×lO‘mol／LODk+4．OXl一mol／Lm＆ 2．Hb模拟酶催化反应体系反应条件的研究32+1．n×，矿。1，I‰ 的影响，结果表明，在KIBP04-NazHPOt缓冲溶液中具有较高的活性；在pH3．0～8．0范围内优 化了pH对反应的影响，结果表明pH6．4为最佳反应pH。ODA和H。如的最佳浓度分别为2．Ox 10‘3mol／L和4．OX 10～mol／L，在此条件下，50℃反应30min后催化反应即达到平衡。 3．电化学测定条件的研究 考察了IIb模拟酶催化反应产物的电化学响应，在pH8．0的B—R缓冲溶液中具有最大的 极谱还原峰。仪器条件为：起始电位一0．25v，滴汞静止时问16s。电位扫描速度i000mv／s． 4．测定Hb的工作曲线、精密度和检测限 在选择的最优酶催化反应条件和测定条件下测定Hb，在2．0×l矿Ⅳ2．0×101mol／L范 平行测定得相对标准偏差为2．2996． 参考文献 c1】焦奎，张书圣，韦璐。刘澄凡．化学学报啊。1997，55；1121． (21黄应平，蔡汝秀．分析化学[J】．2001，29(4)：378． [3]张玉忠，赵红，袁倬斌．高等学校化学学报明。2002，23(3)：391 ElectrochemicalStudiesOllthe Catalyzed Hemoglobin 0xidafionofo-Dianisidine