基于熔解曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别.pdfVIP

2015年2月l第40卷第4期 凰支．蠡查 Vo1．40，No．4lFebmary，2015 基于熔解 曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别 陈康 ，蒋超 ，袁媛 ，黄璐琦 ，金艳 (1．中国中医科学院 中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地，北京 100700； 2．安徽 中医药大学，安徽 合肥 230038) [摘要] 高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting，HRM)是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术，在中药真伪 鉴定中有着广泛应用前景。文章将高分辨率熔解 曲线技术应用于鹿茸真伪鉴别，利用 cDI序列，在退火温度为60℃，45个 循环数的条件下，建立正品鹿茸药材熔解曲线模型，并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg“浓度的适宜范围。结果表 明，鹿茸药材在模板DNA质量浓度为 10～100mg·L～、引物浓度0．2I~mol·L～，Mg 浓度2．0mmo]-L。。的条件下，梅花鹿 熔解曲线为双峰 ，其 分别为 (81．96±0．07)，(84．51±0．03)℃；马鹿熔解曲线为双峰，其 为 (82．58±0．13)，(85．95± 0．05)oC。该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的鹿茸药材真伪鉴定。 [关键词] 高分辨熔解曲线 ；鹿茸药材；分子鉴定 M olecularidentification ofhairyantlerbyanalysisofhighresolutionmelting CHENKang ，JIANGChao ，YUANYuan ，HUANGLu—qi，JINYan (1．StateKeyLaboratoryofDao—di ，NationalResourceCenterforChineseMateriaMedica， ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，Bejiing100700，China； 2．AnhuiUniversityofChineseMedicine，Hefei230038，China) [Abstract] Highresolutionmelting(HRM)，animportanttechnologyforgenotypingandmutationscanning，hasbroadprospectsin theauthenticityoftraditionalChinesemedicine．ThispaperselecteduniversalCOIprimersandusedHRM toestablishanewmethod forauthenticityofHairyAntler．PCRwasconductedattheannealingtemperatureof60℃ nad45cycles．TherangeoftheDNA tem— plateconcentration，theprimerconcentrationandtheMg“ ionconcentrationwerefurtheroptimized．Th eresultsshowedthattheTm valuesofCervusnipponwere(81．96±0．07)，(84．51±0．03)℃‘andCervuselaphuswas(82．58±0．13)，(85．95±0．05)℃ with 10—100mg ·L一 DNA template，0．2 tLmol·L一 primer，2．0mmol·L一 Mg ．ThismethodCna authenticateofhairynatlerandis simple，fast，high-throughput，visualization． [Keywords] hihg【resolutionmelting；hairynatler；molecularidentification doi：10．4268／cjcm 鹿茸始载于 《神农本草经》，具有壮肾阳、益精 市售饮片常出现各种混伪品，如驯鹿、白唇鹿、