应用高效毛细管电泳技术分离与研究黄连生物碱.pdfVIP

应用高效毛细管电泳技术分离和研究黄连生物碱’ 齐 莉..王雅芬 周 蓉 朱一川 北〔京市新技术应用研究所，北京100035) 黄连是一种重要的中药材，含有数种黄连生物碱，其中小菜碱、黄连碱、药根碱、巴马汀是 其有效成分。它们具有清热燥湿、泻火解毒、清心除烦、抗溃疡、抑制胃液分泌和抗菌消炎等功 效，主要用于治疗痢疾、肠胃炎、气管炎、咽喉炎、扁桃腺炎等病症。目前小聚碱及其它黄连生 物碱己被制成各种制剂应用于临床，如黄连素片、黄连素注射液、万氏牛黄清心丸、三黄片和双 黄片等。中国药典1990年版采用紫外一分光光度法测定黄连总生物碱的含量。也有人采用导数光谱 法、薄层扫描法和高效液相法-【l测定黄连生物碱的含量。 高效毛细管电泳 (HighPerformanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)为80年代初期发 展起来的色谱分离技术。它在色谱技术领域中的地位日趋重要并已广泛应用于中药有效成分的分 离fa+NJ中。本文从方法学角度研究应用毛细管电泳色谱技术分离结构近似的黄连生物碱就显得颇具 实际意义。 与现有的文献报道的方法相比，本实验方法更易于为人们接受，而且分析速度快，分离结果 好。 1仪器与试剂 1.1 仪器 1229HPCE仪器及9423色谱积分仪均由本所研制。 1.2试剂 黄连药材((C.chinensisFranch)购自北京市药材供应站:黄连生物碱对照品由中国药品生物 制品检定所及Sigma公司提供;所用化学试剂均为分析纯。 2方法与结果 _ 2.1 电泳分析条件优选 根据黄连生物碱及HPCE的特点，选择了pH值、电压、甲醉体积分数及乙酸钠浓度这4个因素作 为考察对象，并设计了6组实验，实验安排见表1, 粤 电泳分析条件优选表 实验序号 实验温度 (℃) 电压 tkV) 乙酸钠浓度(mmoVL) 甲醉0 (%) . ， 乃 1 气 筋 2 1 P4H.0I0 ， 卜 2 5 1 0 丹 ︸ 4.50 乃 4 2 飞 ﹄ 乃 勺 4 ‘ 5.00 犯 4 8 4 2 5 J ， 侄 J 5.50 阴 2 1 勺 ﹃ 2 5 1 n 凸 5.25 4 0 4 2 6 2 5 2 月 呀 4.75 6 0 4 8 根据表1中的各项条件做实验，并分别分析标准对照品及黄连样品。从实验结果中优选出了最 佳实验条件，即实验序号3，在此条件下，6种黄连生物碱可实现基线分离。 2.2黄连样品的HPCE测定 毛细管:50cmx59W i.d，50mmo1/L乙酸钠的甲醉 (体积分数为84%)溶液 (含lmol/L的乙 酸)，运行电压:24kV，电流;5uA，重力进样:losUV检测波长:254nm. 样品测定:精确称取2mg小聚碱及黄连生物碱对照品各2mg并取适量黄连样品，分别置于2mL试 管中，加入,p=70%的乙醇溶解后备用(样品溶液需离心后取上清液备用)。按上述电泳条件进行 3k京市自然科学基金资助项目((2952011) .，齐莉，北京西直门大街16号，电话(010217 618 分离测定在12min内6种黄连生物碱可全部实现基线分离，其中，小粟碱的检测线性范围为 0.02500-0.2000Og/L，小聚碱的精密度M定实验结果 (连续进样6次)为:峰面积的RSD小于 3.0%。实验结果见图1.