藏绵羊DRB3基因第2外显子多态性分析.pdfVIP

分子系统学、进化与资源评价 藏绵羊DRB3基因第2外显子多态性分析 成述儒1，一，胡江L2，王继卿2，罗玉柱1，扩 1‘甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州730070；2‘甘肃省草食动物生物技术重点实验室厂甘肃农业大学研究测试中心，兰 州730070 关键词：DRB3基因；多态性；PCR．SSCP；藏绵羊 引言 MHC在机体免疫应答调控和免疫识别过程中发挥着重要作用。作为疾病抗性和易感性基因，MHC组成、 结构及其与疾病之间关系的研究成为抗病育种研究的一个重要部分。绵羊MHC称为OLA(ovinelymphocyte 内还未见报道。为此，本研究利用PCR．SSCP方法对藏绵羊DRB3基因第2外显子的遗传多态性进行检测与 分析，旨在确定藏绵羊该基因等位基因数和多态位点，并分析各等位基因间的遗传关系和进化意义，为绵羊抗 病育种研究提供分子生物学参考。 材料方法 DRB3R：5’．TCGCCGCTGCACACTGAAACTCTC．3’，目的片段285 bp。PCR产物经SSCP检测辨型后，纯化 回收不同基冈型个体PCR产物，构建重组质粒，并转化大肠杆菌DH5ct菌株。SSCP辨型为纯合的个体，挑选 3个优质菌落培养，杂合个体挑选10个优质菌落培养。培养后再次进行PCR．SSCP分析，以证实测序菌落。 序列数据用ClustalX、Dnasp4．0和MEGA3．0软件分析。 结果 首次发现。为了分析藏绵羊DRB3基因第2外显子各等位基因间的遗传关系，对37个DRB3基因第2外显子 的序列进行NJ树的构建。系统树呈现两支分化趋势，其中，1支中有21个DRB3等位基因序列，Ⅱ支中有 16个DRB3等位基因序列。 讨论与结论 MHC的多态性是长期进化过程中等位基因的积累、融合与扩增形成的。产生多态性的机制主要是基因突 变和基因转换。由于绵羊所处的环境(包括地理环境和气候环境)差别很不相同，机体的免疫系统也表现为丰富 的多态性，因此编码MHC抗原最主要功能区的DRB3基因也表现为丰富的多态性。本研究首次对藏绵羊DRB3 基因第2外显子的多态性进行了分析，发现37个等位基因，比Amills和孙东晓的研究结果多30个等位基因， 比刘云芳等的研究结果多13个等位基因。证明藏绵羊DRB3基因第2外显子具有高度多态性，这与藏绵羊常 年生活在高海拔环境下所具有的适应性强、耐粗放管理、抗病性强的特点相一致。同时，也充分表明藏绵羊 群体中蕴藏着更丰富的遗传多样性，是宝贵的遗传资源。DRB3基因的高度多态性也证实了免疫系统的抗原多 样性。DRB3基因第2外显子序列的邻接法聚类图表明，在藏绵羊进化过程中，DRB3基因最初是由2个等位 基因突变分化成两大类等位基因。藏绵羊遗传资源的全面性和代表性，为藏绵羊MHC特异单倍型的选育提 供了理论基础。 致谢 验室建设计划(085RTSA004)资助。 宰通讯作者：罗玉柱，Emaih luoyz@gsau．edu．cn． 一85—