抗病毒转基因马铃薯探究.pdfVIP

∞蛆年全嗣生物安全学术研讨会论文集 抗病毒转基因马铃薯研究? 、 2赵德刚1， 刘作易2’5t陶刚2’3邱又彬1’2李奇科1’2邱初1’2刘新建L 朱英2’4 1．贵州大学生命科学学院，贵阳，550025；2．贵州省农业生物技术重点实验室， 贵阳，550005；3．贵州省植物保护研究所。贵阳，550006；4．贵州省生物技术研 究所，贵阳，5500065；5．贵州省农业科学院，贵阳，550006 摘要：马铃薯是世界性的重要农作物。在我国，马铃薯是位于水稻、玉米、 小麦之后的第四大粮食作物，而马铃薯病毒病是马铃薯生产中的一个重要制约 因素，由马铃薯X病毒t，Pvx)、马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV) 等引起的病毒病是我国马铃薯主要病害，严重影响马铃薯的产量和品质。近年 来防治马铃薯病毒病害主要手段中，通过茎尖剥离、组织培养、扩繁等技术进 行脱毒种薯，能够在产量上成倍的增长，为大力发展马铃薯产业做出很大贡献， 但该技术成本很高，较繁琐。同时传统的抗病育种往往缺乏有效的抗病毒抗源， 而农药防治不仅耗时费力、污染环境，而且对病毒病防治效果不理想。因此， 寻找新的方法解决病毒病害问题是目前马铃薯研究的热点。 本研究利用基因沉默原理和基因删除技术，通过利用农杆菌介导法转化技 术得到对马铃薯X病毒Ovx)、马铃薯Y病毒(pvY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV) 中抗一种、两种和三种病毒并且是不含选择标记基因的马铃薯抗病毒新株系。 同时在本研究中，我们还研究和探讨了一些基础理论和应用基础问题：调查贵 ，州省马铃薯的病毒病害的种类及分布，通过新的试管非特异性捕捉和RT—PCR 相结合的植物病毒基因克隆新技术，克隆了PVX、PVY和PLRV3种病毒的 外壳蛋白基因，并在系统发育上分析了贵州的PVY病毒与世界其他地区该病 毒的差别和株系类别；通过Overlap．PCR(融合PCR)方法解决了抗多价病毒 的转基因植物表达载体构建的问题：建立基因删除(GeneDclctor)系统，在 特定生长发育时期删除转基因马铃薯植株中选择性标记基因或其它外源基因， 。项目资助：国家973重点基础前期研究专项(2008CBll7010)；贵州省科技重大研究专项子项目(黔科含重大 专项字[200816009号)；贵州省农业科学院重点专项项目(院2X[2007]002号)。 ’通讯作者：E-mail：Ⅱ吆uoyi@yah∞．C01D：LCn，Tel：0851-3761761。 ．72· 糊年全目生物『安全掣凛：朝讨会论文：集 ■一I I II—■—鼍—萱————■—■■——————一 从根本上消除了人们对转基因作物和以此为原料制造的转基因食品对人体有 不良影响的担心；探讨由基因沉默介导的转基因植物抗病毒机制，即hpRNA 的有效茎部片段长度大小与基因沉默介导的抗病毒效率的关系，以及来自CP 基因片段的5’或3’端形成的hpRNA反向重复结构与抗病毒效率的关系；构建 了两类以马铃薯Y病毒部分外壳蛋白基因片段为反向重复序列的RNAi植物表达载 体，通过瞬时表达分析研究其抗病毒有效性及不同载体间沉默效率的差异：建立马 铃薯转基因研究的技术体系和平台和标记基因删除体系，构建含有马铃薯块茎时期 特异表达的启动子TSBP的pLFHFGN的基因删除系统，并将该删除系统插入到已 经构上述植物表达载体上，目前正在进行检测删除系统对转基因马铃薯植株的作用 及对转基因植株的影响评价。 本研究是一项重要的应用基础研究。这些研究结果如果能够成功地应用到 马铃薯病毒病害的防治中，不仅可以大大减少由于种薯脱毒过程所需的巨大投 l 资和产生的高成本，还可以通过无性繁殖而长期保持优良种薯的特性，这具有 巨大潜在经济和社会效益；同时首次把基因删除系统应用到马铃薯转基因研究