HepG2.2.15最佳培养条件探讨.pdfVIP

慢性乙型肝炎抗病毒治疗难点和热点学术会议汇编 HepG2．2．15最佳培养条件探讨 陈婷彭少华 人肝肿瘤细胞株HepG2广泛应用于遗传毒理血清含量为20％时，细胞24h后大部分贴壁，且增 学试验…、外源性生物性异物的细胞毒性[2-31、病毒殖速度最快，4d后可按l：2比例传代；当接种密度 X (如乙型肝炎病毒)感染机制等方面的研究。而 小于1 103／era2和(或)血清含量少于20％时，细 胞表现为贴壁困难，出现进行性退化，当接种密度 HepG2．2．15来源于HepG2细胞，里面转染了两段 X rain 完整的HBV全基因，通常作为乙肝病毒感染的细胞 小于l 104／cm2，血清含量为20％时，细胞24 模型，进行抗病毒治疗药物的药效和药物的毒理试 后大部分贴壁，但增殖速度明显减慢，约30d后才 验研究。但由于HepG2．2．15细胞培养难度较大，常可按l：2比例传代。 不易培养成功，因而我们根据本实验室的条件，对 2．消化时间与温度的影响：结果发现28～30(2 rain HepG2．2．15细胞培养增殖的最佳条件进行了探讨。时消化4rain，30～35℃消化3min，37℃消化2 时，细胞分散程度最好，均呈单个分散贴壁且死细 材料与方法 胞最少；在上述温度下，消化时间过短，细胞不能 1．细胞株：HepG2．2．15细胞为美国耶鲁大学 被充分消化分散，细胞成团生长，消化时间过长，出 医学院惠赠。 现较多死细胞。 2．试剂：DMEM培养基(高糖型)、胎牛血清 (美国Gibco公司产品)、L一谷氨酰胺(美国Gibco公 影响：第l天镜下观察复苏细胞与传代细胞大多悬 司产品)、胰蛋白酶(德国BiochromKGSeromed公 浮于培养液中，折光性强，胞体呈圆形。第2天复苏 司产品)、HEPES(德国默克公司产品)、碳酸氢钠 细胞培养液较第1天略偏碱，镜下观察细胞仍大多 (上海虹光化学厂)以及青霉素与链霉素(华北制药悬浮于培养液中，细胞有缩小趋势，折光性较好；传 股份有限公司)。 代细胞培养液较第1天略偏酸，镜下观察细胞已贴 3．方法：(1)复苏时接种密度与血清含量：将壁，折光性好，少数细胞出现伪足。第3天复苏细胞 冻存HepG2．2．15细胞复苏清洗、离心后接种于 培养液明显呈碱性，镜下观察细胞多数悬浮于培养 10 X X ml培养液中，接种密度分别为l106／cm2、l 液中，有部分细胞已缩小，折光性差；传代细胞培 x 10：‘／cm2、l×104／cm2、l103／crn2，血清含量分别 养液明显偏酸性，镜下观察大部分细胞已伸出伪足， 为10％、15％、20％、25％。(2)消化时间与温度： 细胞轮廓清楚，折光性强，细胞数量明显增多。 111l 吸取2 0．25％胰蛋白酶消化细胞，消化温度分别