一种杀细菌剂离体筛选新方法地研究·.pdfVIP

．570． 中国化工学会农药专业委员会第九届年会论文集 一种杀细菌剂离体筛选新方法的研究。 周青春1 罗勤2 庄农渡1 (华中师范大学1农药化学研究所．2生命科学院，武汉430079) 摘要：本文为采用改进的m方法建立一种新的快速、灵敏细菌离体生鼬方法，对一些最适条件进行了研 ● 究，结果表明：加砌阡溶液共培养1．5h即可测试：测试波长为540hm，参考波长为440hm；测定细菌范 围为lO‘一10。／皿l，该方法快速简便、节省材料，客观可靠，将在新杀菌剂创制，基础研究等方面广泛 应用． 关键词：杀菌作用：快速离体生测：MTT ’ 目前，用于研究天然产物和化舍物抑菌作用的离体方法主要为琼脂糖扩散液体稀释定 量法，这两种方法的操作和取得数据都颇费时间，并且需消耗大量的试剂。随着研制新农 药的发展，杀菌剂开发已扩展到从天然产物中探索杀菌活性物质，生测工作量剧增，因此， 一些常规生测技术急待改进． 本文试用改进的MTT法建立一种快速杀菌荆筛选方法，以适应新农药刨制所需要，现 将这方面的研究内容报告如下。 一·材料与方法 1．1 试验材料 1．1．1菌种 水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzae)引自江苏农业科学院。 1，1．2试剂 Ig，蒸馏水1000m1)pH 营养培养基’(蔗糖209，牛肉浸膏59，蛋白胨lOg，NaCI 为7．0广’用于细菌培养。 溶于蒸馏水中，配成5rag／ml，置4℃冰箱待用。 溶剂A：将SDS(十二烷基磺酸钠)溶于异丙醇中配成3％浓度，然后调pH至45，置4 ℃冰箱待用。 20％叶枯宁可温性粉剂为四川化工研究所产品，青霉毒、链霉素为常规医用注射用剂。 ● 1．2 试验方法 7～10‘／Ⅲl 取处对数生长期细菌，用显微计数法得出细菌密度，用培养液稀释成10 浓度。在无菌96孔板中，第一排第1孔加入一定量的药液后，依次按需稀释至第8孔，然 后每孔加入供试菌100p 1，第9、10孔作对照，每一浓度梯度重复5～8次。培养板置 u 1，再培养I．5h即可离心(3000r／min)，10 37℃培养2．5h后，每孔各加入^仃T溶液10 分钟。弃上清液，每孔加入200u 1溶剂A，振荡数分钟或用加样器吹打数次，待蓝色结 下式计算化合物抑菌百分率： ’ xl。。％’ 抑菌百分率怫’。“一蔷蕊OD对照孔 值… 中圆化工学会农药专业委员会第九届年会论文集 ·571· 二·结果 2．1 细菌产生的甲膳吸收蜂的测定 考波长为440hm。其吸收蜂与细胞产生的甲琏陬收峰相近，而参考波长差异很大，这可能 ● 与培养基不同有关． ● 图T 细菌转化的甲嘲酸收光谱 2．2 MTT微量快速法的培养适宜时间． 本文实验中均采用加入MrT溶液后培养1．5h：药剂对细菌的作用时间在参考有关文献后确 定为曲。 2．3 MTT快速法中OD值与菌量的关系 将白叶枯菌稀释到1．8×10’／ml后，对倍稀释