从黄芪多糖对TLR4、NF-κB表达影响探讨高血压病血瘀证的形成机制.pdfVIP

中华中医药学会中医基础理论分会第三届学术年会论文集 从黄芪多糖对TLR4、NF-KB表达影响探讨 高血压病血瘀证的形成机制 张竞之 陈利国 暨南大学医学院 广州 摘要 目的：通过TLR—N卜KB信号转导通路，探讨高血压病血瘀证的形成机制。 方法：10％的高血压病血瘀证、非血瘀证患者及健康人血清干预人脐静脉内皮细胞(HU— mRNA表达。不同浓度的黄芪多糖干预脂多糖 VEC—C)24h，实时荧光定量(PCR)法测TLR4 诱导的HUVEC—C B mRNA及NF-K B蛋白 的表达。结果：血清作用24h后，TLR4mRNA的表达按健康组、非血瘀证组、血瘀证组的顺 mRNA高表 序逐渐增高，组间差异显著。黄芪多糖可呈剂量依赖性减少LPS诱导的TLR4 达，抑制LPS诱导的TLR4蛋白高表达和IKBd蛋白的降解，组间差异显著。结论： TLR—NF—K B信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱是高血压病血瘀证形成的机制之一。 Bd 关键词高血压病；血瘀证；发病机制；核因子KB；抑制性K 高血压病(essentialhypertension，EH)是临床常见疾病。血瘀证是中医辨证中的常见证 型，是中西医结合研究的热点，而分子生物学时代的到来使中医证候的生物学原理研究达 到更深的层次。本研究从TLR—NF-KB信号途径入手，通过观察黄芪多糖对EH血瘀证患 者血清损伤的血管内皮细胞TLR4、NF—KB表达的影响，从基因和蛋白层面探讨EH血瘀证 的病理实质和形成机制。 1材料和方法 1．1 病例选择和血清配制 1．1．1病例选择与分组 所选患者均为2007年3月至2008年6月暨南大学附属第一医院符合世界卫生组织， 国际高血压学会统一诊断标准的2、3级EH确诊者。其中，血瘀证(参照1986年修订的诊 (64．60 424 中华中医药学会／中医基础理论分会／2009第三届学术年会 者均排除糖尿病、心、脑、肾等靶器官损害及并发症，检查前1周未服用影响血压的药物。两 组患者的血压分级、性别分布、平均血压、平均年龄、血脂异常无统计学差异(P0．05)。健康 组30人，为暨南大学医学院中医系研究生健康志愿者。血压均在正常范围，与EH患者血 压比较，有统计学差异(PO．01)。 1．1．2血清的收集 患者组及健康对照组均空腹抽血，采血前病人均未使用任何药物，无菌采集前臂静脉 管，恒温水浴箱56℃灭活30rain，一20℃冻存，备用。 1．2细胞与主要试剂 人脐静脉内皮细胞株HUVEC—C，购自武汉“中国典型培养物保藏中心”。DMEM培养基 Kit Real (Perfect Reaserch公司生 9600PCR扩增仪由PE公司生产。Chronm04全自动荧光定量PCR仪由MJ 产。荧光定量PCR特异性引物，由上海英骏生物技术有限公司合成。蛋白Marker购自In_ Ba一抗购自CST公司。二抗购自 vitrogen公司。H—TLR_4一抗购自Santa公司。H—NF．K Cell Signal公司。ECL发光试剂盒购自Cell 电泳槽及垂直蛋白转印槽由Bio-Rad公司生产。APS购自中国药品生物制品检定所，批号： 110708--200505。脂多糖(LPS)系北京普博欣生物技术有限公司生产。 1．3 细胞培养与条件培养基配制 人脐静脉内皮细胞株HUVEC—C，培养于含10％胎牛血清的DM