微生物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂F01-2076A地研究.pdfVIP

微生物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂F01-2076A的研究 林洁郑智慧董悦生路新华金莹单越琦张华贺建功 (华北制药集团新药研究开发中心微生物药物国家工程研究中心石家庄050015) 确的高通量筛选微生物代谢产物来源的抑制剂的体外筛选模型。利用此方法从真菌中筛选到一株阳 性菌株F01—2076，该菌株的发酵液经有机溶剂提取、si柱层析及HPLCODS反相柱层析分离得到一 个活性化合物F01．2076 umol／L。通过对该化合物的紫 A，该化合物对乙酰胆碱酯酶的IC50为23．4 为免疫肌浆球蛋白酶抑制剂和鞘磷脂酶抑制剂报道，但对AchE的抑制活性至今未见报道。 关键词 阿尔茨默氏病乙酰胆碱酯酶抑制剂Altenusin 阿尔茨海默氏病(Alzeimer’S 化性失调，主要病理特征是大脑萎缩、脑组织内老年斑、脑血管沉淀物和神经原纤维缠结，临床表 现为记忆力丧失和认知功能障碍。到目前为止对该病研究和防治仍是一个有待攻破的世界性难题。 近年研究发现，AD的病因主要是神经元突触间胆碱能的不足造成的，所以增加突触间胆碱能成为治 疗AD疾病的主要方向。目前的治疗药物以胆碱酯酶抑制剂为首选。乙酰胆碱酯酶 功能。胆碱酯酶抑制剂可延缓乙酰胆碱的水解，提高乙酰胆碱在突触间隙的含量进而产生治疗效果， (BuChE)的抑制作用造成的。但它们均有不同程度的毒副作用，这些毒副作用严重影响了它们在临床 上的应用，这使得有必要开发毒副作用更小的AChE抑制剂。 材料与方法 1．1筛选用微生物的菌株 菌株由本实验室微生物菌种库提供 1．2试剂及仪器 H20 HN Butylthiocholine(C9 NOSI)，Dithiobisnitrobenzoat(C14 8 208S2)， 225 1420 Victor2多标计数仪 (美国WALLAC) 光照培养箱 (广东医疗器械厂) 中压层析系统 (德国BUCm) 高压液相 (美国Waters) 质谱 (Autospec—Ultima) 核磁共振500MHZ (／nova) 1．3 AChE活性测定方法 对AChE抑制剂活性。测定反应的反应式为： ACllE — Butylthiocholine+H20Butyrate+thiocholine Thiocholine+Dithiobisnitrobenzoat 一 2-nitro一5一mercapto—benzoate 测定反应的操作过程为：在96孔板中加入样品2．6la1(DMSO溶解)，AChE酶液50ul。使用 l-t 加入底物与显色剂以及磷酸缓冲液至总体积为100l，底物与显色剂终浓度分别为lmmol／L和0．5 mmol／L，30℃保温反应2hr，读取每孔的OD值。 1．4 F01．2076的培养 将真菌F01．2076斜面菌株，接种于种子培养基(淀粉2％，葡萄糖1％黄豆饼粉O．2％，麦芽 粉0．6％，酵母粉O．5％，CaC03 0．2％NaCl 0．2％，MgS047H200．2％pH7．O)于27C，72hr摇瓶培养后， 27℃静置培养14天。 均匀后，120℃消毒30min)， 1．5F01．2076A的分离纯化 F01—2076固体培