犬肠系膜淋巴结免疫组化反应的探索.pdfVIP

犬肠系膜淋巴结免疫组化反应的探索木 石保新1，巫 剑1”，米晓云1，古努尔。吐尔逊1，张壮志”，张文宝’，岳城2 (1．新疆畜牧科学院兽医研究所，乌鲁末齐830000；2．新疆农业大学动物医学院，鸟鲁木齐830052) 摘要：通过免疫组化方法，探索犬肠系膜淋巴结对EgM产生的免疫应答。对直接感染原头蚴的肠系膜 淋巴结和EgM免疫后感染原头蚴的肠系膜淋巴结运用直接法和抗原蛋白(EgM)一抗体一抗体酶标物法 (三步法)进行检测，并与空白组对照。结果用直接法证实了犬肠系膜淋巴结上存在IgG强阳性免疫组化 反应；抗原蛋白(EgM)一抗体～抗体酶标物法对免疫犬淋巴结上龟G可定位检测。 关键词：犬；淋巴结；免疫组织化学；直接法；三步法 目前免疫组织化学方法多用于肿瘤和癌症的检 抗原蛋白(EgM)曲℃体句t体酶标物三步法检测宿主犬 验，以及可以在石蜡切片、冰冻组织和细胞制品上检测 肠系膜淋巴结组织中抗体靶位点，通过HE染色与 组织中种类广泛的病原，对活体动物中的病原进行检 DAB染色来判断宿主犬是否能对细粒棘球绦虫分泌 测，亦用于对动物体内病原的动态分布、半定量等研 的蛋白产生免疫应答情况，从而探索研究包虫病终末 女㈣。常规一般采用sP法(金黄色葡萄球菌蛋白A宿主抗虫感染的免疫机理。 1材料和方法 ＆)、ABC法(抗生物素蛋白—生物素连接法)或PAP法 1．1材料 (过氧化物酶一抗过氧化物酶法)，而AGAAP法(碱性 #酸酶一抗碱性磷酸酶法)敏感性较高，但由于种种条 州迈新生物技术有限公司)、二氨基联苯胺(DAB)(北 #的限制，尚不能完全取代SP法、ABC法和PAP法。 这样就给常规的免疫病理工作中的某些抗原如kA， 京中杉生物有限公司)、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 Desmin，Vemintin及淋巴细胞亚群等抗原检测带来一 ≈困难㈣。因此，我们应用抗体夹心免疫诊断原理，用 提供，新西兰大白兔(新疆实验动物中心提供)，其他常 +家畜疫病病原生物学国家重点实验室(中国农业科学院兰州兽医研究所)开放课题资助 啪：讪m必@yahoocom．cn； 均为99．3％，其中86％的羊获得了完全保护罔。该疫苗明该疫苗用于大批量生产是经济可行的嗍。因此E掰 ：免后可产生至少12月的免疫保护。若是第二次免疫 疫苗也是现在抗细粒棘球绦虫六钩蚴感染的唯一商业 目隔6-12个月再加免一次可以产生记忆反映，保护化生产的疫苗。 ￥达100％免疫期为3_4年，畜群可以获得理想的免 鉴于犬在包虫病免疫预防中的重要作用，开发针 受效果。另外免疫能力可通过怀孕母畜垂直传给薪生 对犬的抗细粒棘球绦虫的基因工程疫苗十分有必要。 目§，对初生羔羊和犊牛的保护期分别为3寸-Jq和4—且前，研究比较深入的主要有EgM家族和E931，其重 组蛋白都表现出了良好的免疫效果，相信不久将会有 3个月M。在新疆，青海和l四Jll进行的田问实验和人工 嚣染实验显示E妒5的免疫保护效果良好即唧。据报道 更好的针对成虫阶段的商业化疫苗出现。 ‘L的大肠杆菌培养物可生产出10000份免疫剂量，说 浓度l12 h。 规试剂均为国产分析纯产品。 m—lDl，50¨l，张)，37℃作用1 1．1．2仪器设备组织切片机(上海医药公司)，恒温生1．2430PBS洗三次，2mi,C}k。 1．2 化培养箱(上拇一恒科技有限公司)。 4．3．4一抗：滴加兔高免血清(50¨怫，效价 h。 1．2方法 320000)，37℃作用1 1 2．1犬淋巴结的秉亲