蛋白质在DEAE-Sepharose+FF离子交换层析介质吸附性能地研究.pdfVIP

FF离子交换层析介质 蛋白质在DEAE—Sepharose 吸附性能的研究‘ 胡洪波姚善泾“梅乐和朱自强 31 002 (浙江大学化工学院生物化工研究所杭州 7) 傅晖 012 (上海三维生物技术有限公司 上海2 06) 摘要“Bs^为目标蛋白，考察了弱阴离子交换树脂DEAE．scphamseFF的静态和动态吸附·睦 能，发现温度和溶液pH值的升；I；有利于BsA的吸卅，根括动态吸附数据计算出反应速率常数和孔 内扩散系数． 1 关链词吸附 离子交换牛血清白蛋白 l前言 ． ? 离子交换层析是生化分离中最常用的纯化宠法之一。层析介质的吸附性能决定了分离纯化的 效率，对层析介质进行静态、动态平衡吸附行失的研究，可以考察层析介质的平衡吸附量和传质 情况，为离子交换层析提供一些必要的参数。 FF是目前国内广泛使用的弱阴离子交换层析介质，但有关其吸附性能的研 DEAE-Sepharose 能的影响。试图用动态实验数据来计算吸附过穗韵反应速率常数和溶质在树脂孔内的扩散系数。 2实验材料及方法 2．1实验材料 牛血清白蛋白(BsA)：华美生物工程公司； DEAE FF弱阴离予交换树脂：瑞典AmPharmacia公司； Sepharose 低温恒温槽：宁波市机电工业研究设计院； HD-8858紫外检测仪：上海鞲科实业有限公司。 2．2实验方法 2．2．1蛋白质含量的测定牛衄清白蛋白的含量用紫外分光光度法，在280nm处测量BSA溶液的 吸光值。可以确定BSA的浓度。 2．2．2静态吸附性能研究用缓冲液配制8．Om{／ml的标准BSA溶液，并稀释成不同浓度的溶液， 取各浓度溶液15ml，置于25ml具塞锥形瓶内，加入lml与缓冲液1：1混匀的吸附剂，置于恒温水浴 法测定溶液中的BsA的浓度，并根据物料衡算求得吸附剂吸附的BsA量。 2．2．3动态吸附性能研究动态吸附实验装置如图1所示。盛有溶液的烧杯置于恒温水浴中，由 一恒流泵连接烧杯和紫外检测仪，恒流泵以恒定的流速通过紫外检测仪的检测池，并进行循环。 实验时首先用缓冲液定基线，然后在烧杯中加入100ml一定浓度的BSA溶液，待系统稳定后加入 2mll：l的吸附剂和缓冲液的混合液，烧杯中BSa,浓度的变化由紫外检测仪检测，并通过自动平衡 +国家自然科学基金重点项目(批准号． ”联系人． r—弋—厂一—— 记录仪记录下来。 图1 动态吸附实验装置不意图 ‘ 。 3结果与讨论 3．1静态吸附性能 对于静态吸附，根据chaselll提出的假设，可以认为蛋白质和配基之间进行如下反应， A+L曲AL (1) 式epA表示蛋白质，L表示配基，其反应速率可用下式表示： 粤=klc(q。一日)一如g (2) 式中，kl与也分别为正向与反向反鹰速率常数：g为每ml吸附剂上吸附的蛋白质量；c为溶液中蛋 白质浓度：g。吸附剂的平衡吸附容量。 当吸附达到平衡时，式(2)变为 矿=≠止一‘ ． (3)