磁性琼脂载体的合成和其吸附BSA的研究.pdfVIP

磁性琼脂载体的合成及其吸附BSA的研究 佟晓冬 杨万运 孙彦 (天津大学化工学院生物化工系 300072) 擅喜利用扎液法，制备一种可毗用于快速吸附、迅速分离的新型磁性琼脂垃体．通过修饰色素 (CB)，可阱得到具有选择吸附性的素和硅性栽体．并且研究了选种帝和戢体吸附牛血清白蛋白的 情况以厦不同探作务件对吸附的影响． 关t词磁性琼脂戴律磁分离牛血清白蛋白(BSA)亲和栽体吸附 引言 磁分离技术是根据物质在磁场条件中实现的分离操作。早期的磁分离主要用于矿山选矿、高 岭土纯化、烟道气除尘及污水处理等。在八十年代开始有学者从事将磁分离技术用于生物分离的 研究．并且在细胞的分离和固定化方面取得一定的进展，有望实现某些生物产物的大规模连续分 离，有良好的工业应用前景【”。但是，由于缺乏合适的磁性载体和从事生化研究学者对磁不够重 视和相关知识不足，使磁分离在生物分离中的应用受到限制。台成亲水性磁性载体，是磁分离技 术用于生物分离尤其是在蛋白质分离必不可少的步骤。因此磁性载体的合成是目前各国科学家们 的重要研究课题【2’”。 本文利用乳液法，以琼脂为单体，以共沉淀法合成的Fe，O。磁性胶粒为磁核台成磁性琼脂载 体，并且修饰色素配基(CB)，提高了载体的选择吸附性。我们以牛血清白蛋白(BSA)为目标 蛋白，考察载体的吸附性能，并且研究了不同的操作条件对亲和磁性载体吸附牛血清白蛋白 (BSA)的影响。 l实验部分 I．1实验材料 Blue 琼脂粉，辛巴蓝(Cibacron AJm，包头稀土研究所)。 拉油(当地超市购买)，永磁铁(H。=3．2×105 i．2乳液聚合法制备磁性琼脂载体 i．2．1磁流体的合成 mI与一定量的月桂酸混合，加入到不锈钢夹套 按一定比例混合的FeCI，和FeSO。溶液200 min。 r／min。滴加浓氨水溶液．反应30 式反应釜中，通入循环水．控温50℃，搅拌转速控制在1300 将混合液在磁场中分离，倒去上清液，用稀氨水清洗。再加入一定量的月桂酸，在80℃下．1300 min。 r／mLn．搅拌30 1．2．2磁性琼脂载体的合成 ml的三口瓶中，在恒温水浴锅中保持温度在90 取一定量的色拉油(含3％span80)加入250 ℃以上．以一定转数混合均匀。取10％琼脂在水浴锅内溶解，加入等体积的磁流体混合。缓慢 地将混合液漓入乳液中，搅拌1h。将恒温水浴锅中的热水吸出，加入自来水．温度为15℃． 然后再搅拌30mh． A／m的磁场中沉降，倒出上清液，用丙酮反复洗涤沉降下来的 取出乳液在场强为3．2×10s 磁性载体，直到将油相洗净．再加入蒸馏水反复洗涤，直到洗涤液完全澄清，即得到了制备好的 磁性载体。 用环氧氯丙烷交联，NaBHI还原制备的磁性琼脂载体，具体方法详见文献HI． 4‘3 1．2．3’磁性琼脂载体的修饰 取一定体积的磁性载体和等体积的1．0MNaOH、2．0MNaCI混合，加入一定量的辛巴蓝 M h。反应后加入蒸馏水和0．1 NaOH反复洗涤，直到没 (CB)．在水浴摇床中．45℃下反应24 有游离的辛巴蓝。 1．3吸附实验 分别在离心管中加入约0．1ml的磁性琼脂载体(CB修饰密度为1．7 ml不同 gmol／m1)和6 170 h。在场强为3．2×