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长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2转变温度的研究
孙明忠，祁超，李伟国，赵大庆，倪嘉缵
(中科院长春应化所稀土化学与物理开放实验室，长春，130022)
磷脂酶A胛LA：)是研究脂质代谢、生物膜磷脂结构以及脂蛋白相互作用和脂蛋白结
构和功能的重要的工具酶，它还具有广泛的心血管药理效应，引起了人们越来越广泛的研
究兴趣【1．2I．温度差光谱不仅对蛋白质表面与溶剂接触的发色团发生扰动，而且对分子表面
所有发色团都产生相应的扰动作用，可获得关于分子表面发色团的微环境状况十分有意义
的信息【州．我们利用离子交换和凝胶过滤层析技术首次从长白山白眉蝮蛇(Ag舡strodon
blomho萨iUssurensis)蛇毒中纯化得到了PL～的纯品，并初步表征了它的分子量和纯度．
本文利用紫外双光束温差分光法，研究温度变化对PLA，发色基团的扰动情况，得到了
PLA：的转变温度，并且考察了C矿离子的存在对PLA：转变温度的影响．
1．实验部分
PLA：经4步柱层析纯化得到嘲，制备两份完全相同的蛋白质褡液，分别注入装有恒温
装置的参比和测量光路中，在参比溶液使用的温度下调节基线为零，然后参比溶液的温度
保持不变，而测量溶液通过恒温装置逐步改变测量样品的温度，并同时记录吸光度的变化．
恒温水浴严格调温(温度误差为土0．1℃)，循环水浴仅通过测量池的保温装置．
2．结果与讨论
PLA：的温度差紫外光谱可以反映其生色团环境因温度发生变化而产生的分子构象的
变化．配制两份同样浓度的PLA2溶液，缓冲液为0．02moI／L
Tris-HCI(pH7．50，含有
以看出，当温度上升到72℃时，吸光度的差值出现转折，从而可以碲定PL屯的转变温度
为72℃．在该温度下，PLA：由于温度改变而导致分子构象发生变化．
Temperature{。C)
I．Effect
Figure
The at280rimwasmonitoredAndtheCa：+wasaddedinto
concentration
ofPLA2was0．20mglmL．Absorbance
witIlfinal of0．20t0015．．
thesolution concen咖tion
PLA：溶液中未加入c矿的温度差光谱如图2所示．其所有测试条件与图1的相同．未
酶分子中的发色团的环境更加稳定．
．749．
T(oC)
2．Effect the
Figure On ultra-violet
oftempcmmrc absorptionintensity
ofPLA2
DeterminationWfffC
conditionsthe asin 1 added
Same n0 iIll0thc
Ca2+was
except
figure PLA】solution
◆考文越
覃公平主编．中国毒蛇学(第一版)，南宁：广西科学技术出版社，1995，158．208．
孙明忠，丁兰，赵大庆，倪嘉缵．生物化学与生物物理学报。1999,3
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