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赫肺癌耐药细胞的诱导及其酎药性的韧步研究 275 Lewis肺癌耐药细胞的诱导及其耐药性的初步研究 陆燕蓉林苹张洁王修杰黄孝忠宁其志 肿瘤的多药耐药是化疗失败的重要原因之一，研究其耐药机制，通过各种途径逆转其耐药 性可改善化疗的效果。小鼠肿瘤对抗癌药物的敏感性高于人类肿瘤Ⅲ，因此诱导耐药的小鼠 肿瘤细胞、建立耐药动物模型，对于研究肿瘤耐药的相关机制和逆转耐药的途径、筛选鉴定新 的抗癌药物等具有重要的科研和应用价值。我们经过14个月的渐进式诱导，建立了小鼠 tewh肺癌耐药细胞，并对其耐药性进行了初步研究，为肺癌多药耐药动物模型的建立打下了 基础。 材料和方法 (一)细胞株 C57BL／6小鼠Lewia肺癌体外传代细胞株L3—8由本室建立”J。 (二)主要试剂 1640培养基GibcD公司产品)加15％／ix牛血清(NCS)和青、链霉索各100U／ml。罗丹明一 nlg， (VPl6)由江苏恒瑞医药股份有限公司生产。羟基喜树碱(or)黄石飞云制药有限公司生产。 制药厂生产。卡铂(CDDP)由山东德州制药厂生产。柔红霉素(DN’R)为意大利产品。 (三)实验方法 1．耐药细胞的诱导以渐进式给药法，将L3—8细胞依次培养于吉0．02 ug／ml，0．03坶／ ml ADM中稳定生长传代的耐药细胞。 2．耐药细胞的生长特性 (1)生长曲线和倍增时间的测定：收集生长良好的耐药细胞和L3—8细胞，按常规方法分 ADM 别测定二者在普通1640培养基和台0．15心lId1640培养基中的生长鳇线。计算倍增时 (h)。 x 腋窝皮下，l 1驴／只，观察成瘤时间；接种后第15天处死动物统计成瘤率和平均瘤重。 作者单位：610041成都．华西医科大学附属第一医院肿瘤中心、肿瘤研究所 276 中国癌症研究进展@ 3．晡rr法测定细胞的耐药谱收集生长良好的L3—8和耐药细胞，接种于96孔板，加不 h，每孔加MIT10m，4h后弃上清，加入DMSO 同稀释度的抗癌药，37℃5％C02培养68 0．2ml，孔，用酶标仪测定570nnl波长的吸光度，计算50％细胞生长抑制所需的各药物浓度 (I％)。耐药指数=耐药细胞I％／亲本细胞I％。 耐药细胞，接种于25 c02分别培养2 度。 ADM中培养2h，离心洗去 5．细胞内药物释放速度的比较L3—8和耐药细胞在4Hg／ml 排出率(％)，绘制药物释放曲线。 结 果 I一)Lewis肺癌耐药细胞的建立 ADM中稳定生长、传 13—8细胞经渐进式给药法诱导培养14个月，获得了能在0．4“g，ml 8／ADM经液氮冻存后复苏良好，并能保持耐药特性。 (二)L3—8／ADM细胞的生长特 ∞ 性 1．体外生长特性L3—8／ADM 细胞在普通1640培养基中的生长速 ∞∞ 度于L3—8相近，二者的倍增时间分 鲫