Mu转座复合物电转化方法对芽孢杆菌抑真菌多肽相关基因地研究.pdfVIP

Mu转座复合物电转化方法对芽孢杆 菌抑真菌多肽相关基因的研究 郝建安 曹志辉 范东升 田野 赵凤梅 张秀明 自艳玲 乔明强 (南开大学生命科学学院300071) 摘要：本文介绍了利用Mu转座重组技术对能抑制病原真菌生长的地衣芽孢杆菌茵株进 行的功能基因组分析。Mu转座复合物是由人工Mu转座子(携带一个卡那霉素抗性基因)，在 体外与四聚体MuA转座酶形成，然后，电转化地衣芽孢杆菌的受体细胞，引起插入位点基因 的失活和相应表型的改变，经重组抗性和表型筛选，可以进一步探索未知的芽孢杆茵抑真菌肽 相关基因。用含Glycine的M9一YE液体培养基培养细胞至对数早期(OD600=0．5左右)，制备 感受态细胞，电击电压为1．8kV，在国际上首次成功地将Mu转座复合物电转化入地衣芽孢杆茼 中，转化效率为3．1×102CFU／／zgDNA，同时得到芽孢杆菌抑真菌作用变小的转化子。 关键词：地衣芽孢杆茵；感受态细胞；Mu转座复合物；电转化 Researchon AntifungaiPeptidebyUsingElectroporation With Mu inBacillus TransposomeLichenformis Hao CaoZhihuiFan TianYeZhao Jian’an Dongsheng Fengmei Bai ZhangXiumingYanlingQiaoMingqiang ofLifeSciencesNankai 300071 (College China) University Tianji To aclusterof relatedto in explore genes anti-fungal ofBacillus peptidegenomes lichenformis，an efficientinsertional withMu mutagensisstrategy transpositionwas complexesapplied．Mutransposition areassembledinvitro anartificialKan-Mu and complexes using fourmoleculesofMuAtrans— transposon into posases，thenelectroporatedB．1ichenformis．Thetransformantswitharesistanceto and kanamyein strainswerescreened aphenoIypeagainst ftm$[al tofurther pathogenic fu嘴tiotudger鹭mficanalysis,The cellculture in medium at grownMo-YE containingGlycine30。C，WaslWm,estedatoD6000．：