大鼠脑损伤后COX-2表达变化的时间规律性的研究.pdfVIP

作者简介 要从事催乳素的研究。 吴旭王保捷张国华征德文胡更奕冀振东 陈力学 (中国医科大学法医学院11000]大庆市人民检察院技术科163311) [摘要]目的：探讨大鼠脑损伤后环氧合酶2(COX一2)在神经元、神经胶质细胞中表达变化的时间 规律性。方法：大鼠脑损伤后于不同时间段分别应用原位杂交、免疫组化、免疫组化双染色技术检测 COX一2mRNA和蛋白的表达强度，用图像分析系统测定阳性反应物平均灰度，进行统计学处理。结果： 达到峰值，于伤后3d、4d，表达达到另一峰值，并维持高水平表达分别至伤后7—15d。阳性细胞多为神 经元。结论：脑损伤后COX一2mRNA及蛋白的表达具有时间规律性，可作为法医学推断脑损伤形成时间 的指标。 [关键词]环氧合酶脑损伤大鼠 脑是人体的中枢生命器官，在暴力损伤中极易受累。脑损伤后神经细胞和神经胶质细胞中各种指标表 达改变的时间规律性与损伤形成时间的关系一直是法医工作者潜心研究的重要课题之一。环氧台酶 前列腺素产物，从而维持机体的各种病理生理过程。诱导型环氧合酶，亦称COX一2，在生理状态下， 3。本实验通过 基因表达。且蛋白合成抑制荆不能抑制COX一2mRNA的表达，被认为是一种即时基因u’2 检测脑损伤后不同时间COX一2mRNA及蛋白表达情况，分析其变化规律，试图为法医学脑损伤形成时间 的判定提供新的补充指标。 1．材料与方法 I．I实验动物分组和动物模型制作 损伤14组，每组5只．共计78只。正常对照组动物直接灌流固定，处死取材。假手术组只进行颅骨开 窗，开颅后1d处死。 大鼠称重后，3％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，在人字缝前方2ram，颅骨中线旁2mm，钻直径为 355．09kPa。在伤后规定时间，灌流固定，处死取材。 ‘ 1．2免疫组织化学染色 561 物蛋白一过氧化物酶溶液37℃孵育lOmin，DAB显色。 1，3免疫组织化学双重染色 石蜡切片脱蜡和水化后，过氧化氢甲醇溶液中室温孵育10rain，至加=抗前操作同1，2，链霉卵白素 一碱磷酶轭台物室温孵育10rain，滴加碱磷酶的底物一色素混合液，镜下观察显色结果，双染增强剂室温 一色素混合液，镜下观察显色结果。 1．4原位杂交染色 1．5图像分析与统计学处理 BX 51显微摄影图像分析系统，用400倍显微镜， System／DP10／Olympus 应用MetamorphImage 阳性反应物进行定量检测，测定阳性反应物平均灰度，然后应用SPSS软件下进行统计学处理。 2．结果 2．1 COX一2免疫组化染色结果 始增强，至伤后2d，着色深，达高峰。伤后3d着色略变浅，伤后4d，着色加深，达到另一高峰，并维持 在较高水平表达至伤后15d。 2．2 COX一2与NeuN、COX一2与GFAP免疫组织化学双染色结果 2．3 COX一2原位杂交染色结果 正常对照组及假手术组，COX一2mRNA阳性细胞弥散分布，着色浅淡，大部分为胞浆着色。伤后 15rain 伤后3d，着色加深，达到另一高峰，类似伤后1d改变，并一直维持较高表达水平至伤后7d。 2．4图像分析与统计学处理结果 寰1实验性脑损伤后OOX一2mRNA殛鼍白表达量的灰度(均值±标准差) 05 *与对照组比较：P0．05并与临近上组比较：P0 3．讨论 有研究在太鼠短暂性局灶性脑缺直模型中应用竞争性RT—PCR方法测定了缺血后不同时闽COX一 后6h即开始升高，并分布于缺血梗死区边缘【3，4J。表明在缺血性神经元损伤中，COX一2表达改变具有一 定的时间规律性，为脑损伤后COX一2基因表达的时间