2%2c4-二氯苯酚和人血清白蛋白的相互作用研究.pdfVIP

第2期 光谱钗器与分析 35 2，4一二氯苯酚与人血清白蛋白的相互作用研究 李少旦1黎明强蒙进怀 广西柳州市疾病预防控制中心柳州 545001 李贵荣 湖南省南华大学公共卫生学院卫生检验教研室衡阳421001 摘要：通过2，4一二氯苯酚与人血清白蛋白结合反应的光谱学特征，探讨2，4一二氯苯酚与人血清白 2．743×106 L／mol、结合位点数为n=l。 关键词：2j4氯苯酚人血清白蛋白相互作用 ’ 通过对HSA溶液的荧光特征峰及其在不同条件下的荧光强度变化和荧光峰位移情况的测量，可以获 得外源性物质与生物大分子相互作用的有关数据。作者通过荧光光谱和荧光猝灭的实验，研究了2，4一 研究建立的新的灵敏度高、选择性好的检测方法具有较大的意义。现将研究结果报告如下。 ’ 1材料和方法 1．1仪器和试剂 970CRT荧光分光光度计(上海三科仪器有限公司)； Uv一8500分光光度计(上海天美公司)； X X 1．50 1．50105mol／L 10。5mol／L的HSA(生化试剂)； 2，4．DCP； tris-HCl(pH8．5)缓冲液。所用试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。 1．2实验方法 入em=344nm。 吸收光谱测量：移取1．OmL2，4-DCP溶液于10mL比色管中，加入3．0mLtris-HCl缓冲液，以双蒸水 800nm)。 男 1作者简介：李少旦(1975年12月～)硕士学位 36 2，4一二氯苯酚与人血清白蛋白的相互作用研究 2结果与讨论 2．1 2，4-DCP与HSA的相互作用 2，4-DCP本身不具有荧光，HSA分子中由于存在色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基，使其具有内源荧 光，但由于这些氨基酸的分子结构不同，所以其荧光强度和波长各不相同，其荧光波长分别为：352nm、 溶液的荧光强度有规律地降低(曲线2～6)，在344nm处下降最多。然而其荧光光谱的形状和发射峰的 位置均未发生改变，说明2，4-DCP与lISA发生了较强的相互结合作用，二者之间因存在较强的分子间作 用力而形成了无荧光特性的复合物，这种复合物的形成引起了蛋白质分子整体构型的改变，或引起分子 内共轭体系的变化，并由此造成了HSA分子中色氨酸残 图l2，4一DCP对HSA的荧光猝灭作用 X ^ex／入em=290／nm，CHSA=I．5lOSmol／L 1 to6) C2．4_衄，=0，0．5，1．0}。1．5，2．0，3．0(×10—5mol／L)，(from 基或酪氨酸残基的微环境改变，所以导致物质的荧光发射减弱或熄灭。 ’ 2．2 2，4-DCP致HsA荧光猝灭机理 分子荧光猝灭的机制主要分为动态猝灭和静态猝灭两种。由于两种荧光猝灭机制所受影响的因素不 相同，因此研究荧光猝灭值受影响因素的影响情况和变化规律可以加以判断。动态荧光猝灭主要是由于 溶液分子运动与荧光分子发生碰撞而引起的荧光猝灭。分子之间的碰撞