大鼠小肠缺血再灌注后血中NO%2cSOD浓度和肺损伤的相关性研究.pdfVIP

毒黩蟾稃 是鼠4、扬安血再灌注_l辜血中N()．2DD浓度与砷_誊l伤的棚关蛀磅完 及GM．CSF+TGF pl共培养的骨髓来源的受体未成熟DC注入受体人鼠体内，进行 SD--．Wistar大鼠异基因移植手术，能延长受体存活时问，减轻移植肠急性排斥反应强度， 但作用较供体来源DC为弱。 总之，未成熟DC能够延长受体大鼠生存期以及减轻移植肠急性排斥反应强度，且 以供体来源未成熟DC的作用最为明显。 大鼠小肠缺血再灌注后血中NO，SOD浓 李纪鹏董光龙王为忠项红军第四军医 缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusioninjury,IRI)是临床上常见的一种损伤现象， 缺血再灌注所产生的反应性氧中问产物激活炎症免疫细胞，产生全身炎性反应，随后早期 即可引起远隔器官如肺、肝、肾等多器官损伤，有研究表明严重的肢体缺血再灌注(1imb ischemia l的病 IR)可致急性肺损伤(acute I)¨J。这种AL reperfusion,L lunginjury，AL 理变化主要为肺血管内皮和肺泡上皮广泛受损，但其确切机制和损伤方式仍不十分清楚 I 21。本实验通过建立大鼠小肠缺血再灌注模型，研究血清中氧自由基的表达及肺中Bax， Bcl．2，P53的表达情况及电镜下组织超微结构的变化进行研究，探讨小肠缺血再灌注损伤 后对于肺的损伤及其机制，为研究不同因素引起的缺血再灌注对远隔器官的次级损害的 机制和防治建立基础。 l材料与方法 1．1动物模型 采用由第四军医大学实验动物中心提供的雄性Wistar大鼠“只，体质量200-3009。 购自长春农牧大学兽医研究所)肌肉注射麻醉后，仰卧位固定于操作板上，按无菌手术 min后 操作开腹，提出小肠，于肠系膜根部分离肠系膜上动脉用lO号丝线结扎阻断30 min，l、2 松开恢复血流。于开放后0min(动脉开放即刻)、30 h，l、3、7d切取肺组 织块置409·L以戊二醛，0．Imol·L以磷酸缓冲液(PH7A)固定以备电镜研究；并取 其组织以4％多聚甲醛磷酸缓冲液(O．01molPBS，pH7．4)固定以备免疫组织化学研究。 1．3试剂 Bcl-2，Bax和P53鼠单克隆抗体为MBI公司产品，链霉菌抗生物素过氧化酶免疫组 化染色超敏试剂盒购自福州迈新生物技术公司，DAB为Sigma公司产品。 1．4NO和SOD的测定NO测定： 设空白管(不加标本和亚硝酸钠)、标准管(加入20pmol／L亚硝酸钠)和测定管， min， 测定管内加入0．3mL待测血清。各管混匀放置lOmin，3500-4000转／min离心10 取上清液0．8mL。加入显色剂0．4mL混匀，15min后测其吸光度值。在提前制备的标准 曲线(亚硝酸钠系列溶液)查找相应NO浓度。SOD测定：按测试盒要求设测定管和对 照管，测试管中加入各种反应液和待测血清混匀。37℃恒温水浴40min，加显色剂混匀， 10 min后倒入Icm光径比色杯中，蒸馏水调零，用酶标仪于波550rim比色。按公式(SOD 活力NU，仃Il(亚硝酸盐单位，毫升)=对照管吸光度一测定管吸光度÷对照管吸光度÷50％ ×稀释液倍数)计算SOD活力。对照管中不加血清样本，其它同测定管。 1．5免疫组化方法 la Bax，Bcl-2和P53测定组织块脱水、石蜡包埋后切片，片厚3m。切片经脱蜡水 化后，PBS漂洗lOmin，依次以氧化酶阻断剂和非免疫血清室温孵育10rain，PBS漂洗 15 min，PBS漂洗，再 min后，切片分别滴加Bcl．2，Bax和P53单克隆抗体室温孵育60 山乐走学200,e中国固职琨