苋菜试管苗ama-miR319b前体的克隆及其在苋菜试管苗发育过程中的表达分析.pdfVIP

浙 江 大 学 学 报 (理学版 ) JournalofZhejiangUniversity(ScienceEdition) 第 41卷第 4期 http：／／www．journals．zju．edu．cn／sci VJo1．41NO．4 2014年 7月 u1．2014 DOI：10．3785／j．issn2014．04．015 苋菜试管苗 ama-miR319b前体的克隆及其 在苋菜试管苗发育过程 中的表达分析 刘生财，匡华琴 ，谢礼洋，赖钟雄 (福建农林大学 园艺植物生物工程研究所 ，福建 福州 350002) 摘 要 ：试验以苋菜试管苗及该试管苗发育过程 中各阶段培养物为材料 ，进行 miR319b前体 的克隆及其在苋菜试 管苗发育过程 中的qPCR分析．结果表明：采用 RT—PCR法克隆到苋菜 miR319b前体序列，长 186bp．该前体与烟 草、苜蓿等miR319b前体序列具有较高的同源性，并包含长 21bp的miR319b的成熟序列；利用 qPCR技术研究显 示，该 miRNA在苋菜试管苗发育过程 中的表达具有特异性，在幼苗期时相对表达量最低 ，而在壮苗期和花芽期相 对表达量迅速增加 ，且在花芽期时达到最高值 ；进入开花期，其相对表达量又呈下降趋势，但略高于壮苗期．说 明 ama-miR3196前体在苋菜幼苗期向壮苗期转变及花芽期向开花期转变阶段可能起重要作用 ，这为将来进一步研究 其功能奠定了基础． 关 键 词 ：苋莱；试管苗发育；miR319b前体 ；克隆 ；qPCR 中图分类号 ：$636．4 文献标志码 ：A 文章编号 ：1008—9497(2014)04—435—05 LIU Shengcai，KUANGHuaqin，XIELiyang，IAIZhongxiong(InstituteofHorticulturalB0￡Pc 0Z0g ，Fujian Agricultureand Forestry University，Fuzhou350002，China) CloningofmiR319bprecursorgeneandexpressinganalysisduringthe vitroplantletsdevelopmentbyqPCR inAma— ranthustricolorL．JournalofZhejiangUniversity(ScienceEdition)，2014，41(4)：435-439 Abstract：Invitro plantletsandtheculturesduringtheinvitroplantletsdevelopmentwereusedasthematerialsto clonemiR319bprecursorbyRT-PCR，anditsexpressionlevelduringtheinvitroplantletsdevelopmentinAmaran～ thustricolorL wasconductedbyqPCR．Theresultsshow thatmiR319bprecursoris186bpinlength，including21 bpmaturesequenceofmiR319b．M eanwhilethemiR319bprecursorofAmaronthustricolorL showshighsequence homologywiththatfrom Nicotianatabacum andM edicagosativa．W ithqPCR，wecanfindthattherelativeexp