长角血蜱肠道细菌的分离和鉴定.pdfVIP

长角血蜱肠道细菌的分离与鉴定 Li Yil， Yongzhi。，ZhaoSuhua3，Liu Chunhongu，Zhou Jie2。ZhouJinlin2。 ZhangHoushuan92，Cao Animal 仃．Collegeof Medical,HunanAgriculturalUniversity,Changsha ResearchInstituteChinese Veterinary Academyol 200241。China； of AgriculturalScience,Shanghai andTechnical 3．CollegeofVocational ofSu咖OU，Suzhou234101，China) 摘要：长角血蜱是一种动物体表专性吸血寄生虫，可传播多种病原体，是我国主要媒介硬蜱之一。 为深入研究肠道细菌在蜱的生理学和传播病原上的作用，本研究进行了长角血蜱肠道细菌的分离鉴 定。按细菌传统分离方法并结合16S sp．)、考克氏菌属(Kocuriasp．)、葡萄球菌属(Staphylococcus 短杆菌属(Brevibacterium sp．)5个菌属。 rDNA 关键词：长角血蜱；肠道细菌；系统分类法鉴定；16S 节肢动物肠道中存在着大量的正常微生物菌群，一般认为这些微生物菌群是寄主正常生命活动 所必需的，它们含有多种酶系统，不仅在维生素合成，脂肪和碳水化合物的吸收与利用中起着重要 作用；而且在抵御外来菌的侵入与定殖，促进免疫系统的功能中也起着重要作用。病原一传播媒介． 宿主的相互关系中，传播媒介肠道是病原和媒介的关键接触点。近年来，已有媒介肠道微生物对病 原传播影响的报道，如Pumpuni等报道实验室饲喂按蚊成蚊G。菌或G+菌与恶性疟原虫配子体，结果 albimanus)，结果仅l％蚊子感染疟原虫，而吸不含粘质沙雷菌 原虫血共同感染白魔按蚊(Anopheles 血的对照组白魔按蚊有71％感染疟原虫。Welburnand 在影响媒介传播能力上有一定意义，可作为探索阻断病原在媒介传播新型防治技术研究内容。 目前，已有少量关于媒介硬蜱体内可培养细菌的报道，Rudolf等研究采自野外不同发育阶段的 欧洲3种主要媒介蜱体内可培养细菌发现，87％菌株属于G+菌；Murrell等调查澳大利亚5种硬蜱体 内细菌发现葡萄球菌属、芽孢杆菌属及狭长平胞属是常见茵属。长角血蜱是我国主要媒介硬蜱之一， 已在17个省区发现该蜱，可传播病毒、细菌、寄生性原虫等多种病原体。但是，有关其肠道细菌的 研究报道尚未见到。本试验对长角血蜱肠道细菌进行分离和鉴定，为了解长角血蜱肠道细菌的种类 和作用、进一步探讨肠道细菌在蜱的消化生理学和传播病原上的作用奠定基础。 1材料与方法 1．1虫源 孤雌生殖蜱群长角血蜱，由中国农业科学院上海兽医研究所提供，最初采自上海野生动物园。 饱血若蜱经蜕皮孵化成成蜱，用于本实验研究。 1．2培养基及应用 化培养基【9】。其中NA和LB培养基用于一般细菌分离培养，PDA培养基用于真菌培养，NB培养基 184 用于培养性状观察，KB培养基用于3％KOH区别菌株的革兰氏反应。 1．3长角血蜱肠道细菌系统分类法鉴定 1．3．1．肠道细菌分离长角血蜱成蜱放入75％酒精中浸泡2．10min，无菌水洗涤，于显微镜下解剖， 无菌操作取出消化道于加入lml灭菌PBS液的灭菌研钵中研磨混匀，用PBS液做一系列稀释，各取 o．1ml于各培养基用涂抹法进行分离，置于30oC培养箱培养48．72h。然后挑取表征各异的菌落在相 应培养基平板上划线，纯化，培养。纯化后菌落挑菌、摇菌，用30％甘油+70％LB与菌液以l：l比 例进行编号保存于一700C。 1．3．2肠