内质网应激在大鼠暴发性肝衰竭肝细胞凋亡中的作用与其相关机制.pdfVIP

PDTC)对暴发性肝衰竭大鼠模型肝组织NF—KB活性的抑制作用以及对肝细胞凋亡的影响，探 讨NF—K B在暴发性肝衰竭肝细胞凋亡中的作用机制。方法：应用D一氨基半乳糖(D-GalN)+ 脂多糖(LPS)制造暴发性肝衰竭大鼠模型即模型组；腹腔注射PDTCl00mg／kg进行预处理即 PDTC组。采用免疫组织化学、RT—PCR方法动态检测NF—KB蛋白及mRNA表达，同时应用HE染色、 流式细胞学技术、TUNEL方法联合对肝组织细胞凋亡情况动态观察，比较两组大鼠肝组织 NF-K B表达及肝细胞凋亡的变化。结果：1．两组肝组织大体肉眼观察，模型组大鼠给药后 随着时间的延长出血、淤血逐渐加重，24dx时肝脏表面呈暗红色，弥漫出血、大片淤斑。PDTC 组出血、淤血情况较模犁组轻，至24dx时仅有小片出血、淤血斑。2．HE染色显示，在模型组 早期以肝细胞凋亡为主，12d,时开始出现大片细胞坏死，24d,时肝细胞坏死严重，仅少量肝 细胞残存；PDTC组早期细胞凋亡及后期肝细胞坏死均较模型组减轻(pO．05)。3．肝组织 NF-K BmRNA表达，模型组随着给药时间的延长呈现上升趋势(x2=26．307，p=O．000)。在 PDTC组肝组织NF—KBmRNA表达在给药后2、4、8小时较模型组表达降低(p=O．Ol，0．01， 0．025)；24小时表达较模型组增加(p=0．004)；与蛋白水平表达基本一致。4．流式细胞学检 能够有效抑错IJNF-KB蛋白及mRNA表达；抑％0NV-KB表达后肝细胞凋亡减轻，提示NF-KB在暴 发性肝衰竭肝细胞凋亡中起重要作用。 内质网应激在大鼠暴发性肝衰竭肝细胞凋亡中的作用及其相关机制 河北医科大学附属第三医院感染科050051甄真刁青葛海燕赵彩彦周俊英 【摘要】目的：暴发性肝衰竭(fulminanthepaticfailure，FHF)是由多种原因引起 的大量肝细胞急性坏死和严重肝功能损伤所致的临床综合征。暴发性肝衰竭具有起病急、进 展迅速、并发症多、病死率高、预后极差的特点，是当前国内外研究的热点和难点，其发病 机制仍未完全阐明。目前研究认为，暴发性肝衰竭与肝细胞凋亡密切相关，但其具体作用机 制尚不清楚。内质网应激是除死亡受体活化和线粒体损伤外又一条新的介导细胞凋亡信号传 导的通路，与许多肝脏疾病相关，是目前国内外研究的热点。内质网(endoplasmic reticulum，ER)是细胞内最大的膜网络结构，具有合成、力n-c_蛋白参与代谢和细胞信号处理 reticulum 功能。内质网应激(endoplasmicstress，ERS)是指由于某种原因导致细胞内质 网生理功能发生紊乱，钙稳态失衡，错误折叠或未折叠的蛋白质在内质网腔内聚集的一种亚 细胞器的病理状态，是使错误的蛋白质恢复正确构象并能够进一步加工所必需的步骤，是一 种细胞自我保护的机制。但是过强或长时间的内质网应激则可能导致细胞凋亡。内质网应激 overload 反应过程中，当大量膜蛋白在内质网沉积时，可激活内质网超负荷反应(ER K response，EOR)，．NF—KB(nuclear factorB)被活化，在EOR信号通路 transcription 中需肌醇蛋白1(inositolrequiringl，IREl)处于中心地位，IREl是内质网跨膜蛋白， 参与内质网应激反应的适应、警戒、凋亡三个阶段，内质网应激时IREl活化，聚集肿瘤坏 necrosis factor 死因子受体相关因子2(tumor factor associated2，Ttb～F2)， receptor 引起NF—KB活化。NF—KB是一种广泛存在于细胞中具有多向性调节作用的核转录因子，与 细胞凋亡关系密切，其参与多种凋亡相关基因的转录调控，具有抑制细胞凋亡和促进细胞凋 B诱导激酶(NF—KB 亡的双重作用。而且有研究表明TRAF