安丝菌素P-3产生菌的菌种选育与发酵罐工艺研究.pdfVIP

安丝菌素P-3产生菌的菌种选育及发酵罐工艺研究 沈晓放 伊丹 陈少欣* 中国医药工业研究总院上海医院工业研究院，创新药物与制药工艺国家重点实验室，上海200040 摘要：目前报道的安丝菌素P-3(AP-3)的发酵单位极低，本研究旨在提高AP-3的发酵单位。以珍贵橙色束 丝放线菌SIPI-3-21为出发菌株，通过UV诱变及庆大霉素抗性平板筛选，获得AP-3产量提高突变株 SIPI-U-76。将该突变株放大到5L发酵罐上进行培养研究。通过对搅拌转速的控制，种子培养时间的优化 以及发酵培养基的调整，AP-3的发酵单位达到了378mg/L。 关键词：安丝菌素P-3;珍贵橙色束丝放线菌；发酵 MutationBreedingandFermenterProcessfortheProductionofAnsamitocinP-3 SHENXiaofang YIDan CHENShaoxin StateKeyLabofNewDrugPharmaceuticalProcess,ShanghaiInstituteofPharmaceuticalIndustry,China StateInstituteofPharmaceuticalIndustry,Shanghai200040 Abstract:TheyieldofansamitocinP-3(AP-3)wasverylow.Thepurposeofthisstudyistoimprovetheyieldof AP-3. ActinosynnemapretiosumSIPI-3-21wastreatedwithUVandscreenedintheresistantplateofgentamycin. AmutantSIPI-U-76withhigherproductionofAp-3wasobtained.Thefermentationprocessfortheproductionof AP-3byActinosynnemapretiosumSIPI-U-76wasenlargedto5Lfermenter.Bycontrollingthestirringspeed, optimizationoftheseedculturetime,adjustmentofthefermentationmediumon5Lfermenter.TheyieldofAP-3 reached378mg/L. Keywords: ansamitocinP-3;Actinosynnemapretiosum; fermentation 5．O；川6 发酵培养幕／g．L～：玉米淀粉30．0，倦j绚糖20．0，棉籽饼粉30．0，CaCl210．0，CaC03 5．5。 mol／L氢氧化钾溶液调垒pH 1．2 仪器与设备 515型高效液幸Il色谱仪和2487型检测器‘荚国Waters公司)。 5L玻璃发酵罐(上海{5I}兴生物)。 1．3 方法 1．3．1 发酵液预处理方法 min，上清液经0．451lm 取发酵液Iml，用等体{|}{的95％乙醇浸泡超声30rain，离心(12000xg)5 滤膜过滤后，用HPLC法测定AP．3的发酵单位。 1．3．2 色l普条件 mmx250 Cl。柱(4．6 mm，5岬)；流动j}11．-甲醇·水(75：25)：流速：O．8ml／min： 色潜柱：Hypersii 柱温：’30℃；检测波长：252irlm；进样量：fO pl。根据标准品浓度计算发酵液中AP．3的含量。 1．3．3 菌体生物最(PMV)测定 min。测定离心菌体体积． 吸取发酵液10ml。离心(4000xg)10 发酵液总体移{一上清液总体移{ PMV(％)=