三肽囊素(Bursin)在鸭胚胎期免疫生物学调节机制地研究Ⅰ.MTT法检测对细胞免疫的效应.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会论文集 三肽囊素(Bursin)在鸭胚胎期免疫生物学调节机制的研究 I．MTT法检测对细胞免疫的效应 谌南辉，毛娅卿，翁岽鹏，刘烈发，章振华 (江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌330045) 摘要：选择240枚静脉清晰的13日龄樱桃谷鸭胚，随机分成I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ共4组，每组60枚，第1组为生理盐水对 照组，第Ⅱ组为低浓度(10pl∥mL)Bursin组，；第i组为中浓度(10 ng／mL)组，第四组为离浓度(10-2斗g／mL)组，皆于13 日龄时分别静注0．1 mU胚。以鸭淋转试验(w胛法)检测各组鸭出壳后O、14、25、32日龄时的细胞免疫功能并观察体 外淋巴细胞培养时的生长情况。结果表明，低剂量Bursin对鸭体细胞免疫功能有较强的促进作用，而中、高剂量Bursin 反而有一定的阻抑效应。 关键谰：鸭；Bursin；细胞免疫功能；mrr法 Bursin是法氏囊组织提取物中一种非常重要 除法氏囊的小鸡出现法氏囊复生，还可以显著提高 的活性因子。它在体外能够促进禽类和哺乳动物前 新城疫和法氏囊病疫苗接种鸡的抗体水平，延长抗 体B淋巴细胞的分化和增殖，在体内能使胚胎期切 体持续时间。 淋巴细胞转化试验是利用淋巴细胞与抗原或 有丝分裂因子(简称为丝裂原)在体外共同培养，导 基金项目：江西省自然科学基金(0330059) 致淋巴细胞的代谢和形态发生一系列变化，进一步 转化为淋巴母细胞这一特性来反映机体免疫状态 作者简介：谌南辉(1947一)，男，教授，主要从事动物免疫学 基础理论及应用研究． 的一种试验，是细胞免疫的一个测定指标。本试验 也乖出乖出乖出乖出带出帘出帘出乖出乖出乖出察出带出牢出察出乖出乖出舔出带出乖出乖出帘出乖出尜出乖出乖出乖出毋出幂出乖出帘出幂也尔牝乖出尔出帝出乔{尘：秘!‘乖逝擎{尘．秘‰带譬芊±％≮ 2．6重组杆状病毒的筛选及目的蛋白的表达经 也证明了这一点。鸭与鹅干扰素之间是否具有种属 提纯的重组转移载体分别与线性杆状病毒共转染 特异性，还有待进一步的研究。 St9细胞，经3轮噬斑筛选纯化，PCR鉴定成功获得 鸡、火鸡、鸭和鹅等禽类的IFN—ft．的氨基酸序 重组杆状病毒(见图lO)。分别用重组病毒感染sf9 列都具有2—4糖基化位点，人和哺乳动物的 细胞，表达外源目的蛋白，经SDS—PAGE电泳鉴定 IFN—Ot的氨基酸序列糖基化位点较禽类的少或没 目的蛋白获得成功表达，IFN一仪／IFN一1融合蛋白有，这是在进化过程中基因突变造成的或是选择压 分别为40ku、39ku(见图11o 力造成的变异，随着更多、更深入的研究或许这一 问题会得到解答。在我们的研究中昆虫细胞融合表 3讨论 达的鹅IFN—O／．蛋白被糖基化修饰，2个糖基化位 干扰紊是最早被研究，同时也是研究最为详细 点贡献约10ku的分子量，而IFN—Y蛋白的3个 的细胞因子之一。秘晶纬等对鹅干扰索基因的克 糖基化位点贡献约15ku的分子量。鹅体内自然产 隆，丰富了干扰素的研究内容。鹅IFN一俚／IFN一1 生的IFN一0【是否被糖基化修饰，还有待进一步研 和鸭IFN—dflFN一1的核苷酸同源性为96．35％ 究。鹅IFN一0【／IFN一1原