康乐霉素产生菌航天变株F-16地研究.pdfVIP

康乐霉素产生菌航天变株F-16的研究，Ic 孙承舭赫卫清王以光高荣梅白硕可郑焕容困周建琴枞 (中11医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050) 摘要为提高免疫抑制剂康乐霉素c的产量，康乐霉素c产生菌，地中海诺卡氏菌康乐变株1747—64 的孢子搭载神舟三号无人宇宙飞船进行了航天育种。本文报道了该菌株航天育种的条件；菌株返回 地面后的存活率；高产菌株的筛选，高产菌株F一16康乐霉素C的产量及应用分子探针检测到F．16 菌株中含有安莎类抗生素的AHBA合酶基因的保守序列。讨论部分简要综述了我国航天育种在微生 物药物开发中的作用及取得的成果。 关键词 航天育种， 康乐霉素c，地中海诺卡氏菌康乐变株1747．64，神舟三号宇宙飞船 康乐霉素产生菌是从我国广东省康乐地区土壤中分离到的一株新菌种，定名为地中海诺卡氏菌 康乐变株1747．64…。迄今为止发现该菌种产生至少两组新抗生素，由萘醌型安莎类和苯马戆醌类化 合物组成，统称为康乐霉素，包括康乐霉素A[zl，康乐霉素CO,41，康乐霉素D【卯，康乐霉素M[6】。 其中康乐霉素A，康乐霉素D为萘醌型安莎类抗生素，结构与利福霉素相近。康乐霉素C，康乐霉 康乐霉素D为PKSI型；康乐霉素C，康乐霉素M为PKSII型。从这两类抗生素在发酵液中的产 量来看，康乐霉素A，康乐霉素D为主要成分，康乐霉素C和康乐霉素M为小成分。 图1．康乐霉素产生菌产生的新抗生素 #∥ {本课题受2002年国家自然科学基金资助，课题t孙承航男生于1966年，博士，副研究员}+t通 讯作者：周建琴jianqinzhou2000@yahoo．tom．cn 169 康乐霉素C生物活性广泛，除有抗肿瘤活性和弱抗菌活性外，还有明显的免疫抑制活性，能显 著地抑制刀豆素A(Con A)，植物凝集素(PHA)等T-细胞丝裂原和同种异型抗原刺激下，小鼠脾细 胞的增殖【3’8】，是一个具有开发潜力的免疫抑制剂，目前作为一个新化合物康乐霉素C已申请了国家 专利‘91。 野生型地中海诺卡氏菌康乐变株1747．64，摇瓶的发酵实验表明，康乐霉素C产量极低 (O．1ug／m1)。为提高康乐霉素C单位，积累进一步药效学和毒理学研究用样品，对野生型地中海诺 卡氏菌康乐变株1747。64进行了包括紫外诱型10】，微波诱变㈣和r-射线诱变在内的各种手段的育种 实验，获得了产量相对较高的U一7，U。10，U。15(u代表经紫外诱变获得的变株)，M一13(M代表 经微波诱变获得的变株)，r-33(r代表经r-射线诱变获得的变株)，经摇瓶的发酵实验研究表明，变 无人宇宙飞船(以下称神舟三号)进行了航天育种，本文报道了该次航天育种的初步研究结果。 1．材料与方法。 1．1菌株材料： M一13，1，．33)的孢子在实验室中无菌操作，分别接种于A，B，C三组沙土管中，每组由5支相同的 灭菌硬质塑料管组成。A组作为地面对照组，在实验室内4C保藏。B组和C组用布袋分别包好后， 置于神舟三号返回舱的不同位置，作为航天搭载样品。 1．2培养基和培养条件： 0．001％FeS04·7H20，0．05％MgS04·7H20，2％琼脂，28C培养7天。 ml，250 于种子培养基(装量50 ml三角瓶)置于28℃，200rpm的旋转摇床上振荡培养48小时。 好的种子以5％的接种量转入发酵培养基(装量100ml／500 旋转摇床上振荡培养90--一96小时。 1．3航天搭载条件和太空飞行环境： 康乐霉素产生菌搭载的神舟三号于2002年3月25日晚10时15分，从我国甘肃省酒泉发射中 心发射升空，10分钟后进入预定轨道，神舟三号的倾角为42．2度，轨道近地点约为332到338千 米。神舟三号飞行的第二阶段倾角仍为42．2度，变轨为近地点在198到326千米之间。发射后的 分返回舱安全返回地面，运行时间162小时，舱内温度为(23±1)℃，受到宇宙射线辐射强度0．095～ 学院医药生物技术研究所，4C保藏。 1．4康乐霉素C的提取和检测方法： 】70 60 色谱(HPLC)分析。TLC板(Silica