穿孔素与颗粒酶B检测对胰腺移植急性排斥反应早期诊断研究.pdfVIP

2006年第四届全国胰腺癌诊治研讨会论文汇编 穿孑L素和颗粒酶B检测对胰腺移植急性 排斥反应早期诊断的研究 韩方海 张肇达 刘续宝 胡伟明 柯能文 田伯乐 李全生 四川大学华西医院普外科(成都610041) 胰腺移植和胰肾联合移植是治愈糖尿病 以及糖尿病并发症的有效手段。在外科手术 RaOne RNAPCR 成功率提高以后，胰腺移植以后发生的急性 Step Kit(AMV)：购自 Takara Marker 排斥反应从而导致免疫性病理损害是使移植 Shuzo日本；MNADL2000：购 物丧失功能的一个主要原因。由于缺乏早期 诊断胰腺移植排斥反应的比较敏感且特异 ER one凝 性的指标，至出现临床症状或移植物功能改 PCR仪：美国Bio—Rad公司；Quality 变时已不是排斥反应早期，此时只能控制但 胶成像分析系统：购自美国Bio—Rad公司。 Terminator 不能逆转免疫性病理损害造成的组织损伤。 测序反应试剂：BigDyeTM Cycle 急性排斥反应主要是T细胞介导的免疫应 SequencingReady，Reaction 答，CD84-活性CTL细胞分泌的穿孔素和颗 377 DNA 粒酶杀伤靶细胞以及颗粒酶和Fas—Fasl途径 诱导靶细胞凋亡是造成移植器官免疫病理损 1．3实验动物分组 害的主要原因。CTL细胞毒性效应分子穿 实验动物随机分为三组，工组8头，Ⅱ组 孔素和颗粒酶B在发生急性排斥反应的早期 与Ⅲ组每组16头，并分为供、受体两组进行 即可在外周血和移植胰腺局部表达，其可以 同种异体胰十二指肠移植手术，移植术式为 作为早期诊断急性排斥反应的敏感、无创及 经门静脉回流和肠内引流手术。分别在初 特异性指标。本研究探讨穿孔素和颗粒酶B 次开腹手术以后1、3、5及7d开腹，取胰腺 在外周血的mRNA表达对胰腺移植急性排组织。分别用10％的中性甲醛溶液和液氮 斥反应诊断价值。 保存，分别进行H—E染色和免疫组化染色。 1材料与方法 I组：对照组，只进行开腹手术，游离胰腺； 1．1 实验动物 Ⅱ组：移植组，切除受体胰腺建立1型糖尿 四川当地杂交长白猪，体重25～30kg， 病模型，进行同种异体胰十二指肠移植手术； 猪龄4个月，雌雄不限。 Ⅲ组：免疫抑制剂治疗组，建立1型糖尿病 1．2实验材料 模型以及移植手术与Ⅱ组相同，同时给与免 葡萄糖(Glu)测定一G0nPOD法试剂盒：疫抑制剂治疗。 购自四川MAKER公司；血浆胰高血糖素 1．4免疫抑制治疗方案及给药方法 (Glucagon)放射免疫分析试剂盒：购自北京 北方生物技术研究所；免疫活性胰岛素放免 8 案：移植手术中静脉注射CsA rag／kg，甲强龙 试剂盒：购自成都