β-环糊精对手性2%2c4-滴丙酸甲酯酶促水解的影响.pdfVIP

第三届全国环境化学学术大会论文集 D-19 β-环糊精对手性2, 4-滴丙酸甲酯酶促水解的影响 文岳中 刘维屏 浙江大学环境与资源学院环境科学研究所，杭州，310029 关键词：β-环糊精，手性，2，4-滴丙酸甲酯，酶促水解； 分类：水体污染及控制 1 前言 环境中存在的手性有机污染物的选择性已受到人们的广泛关注，在手性污染物的选择 性降解过程中，酶促生物降解处于主导地位，非酶促过程(如光解、水解和挥发等) 通常都没有对映选择性。因此有必要对手性污染物如手性农药的酶促对映选择性降 解进行深入研究，了解环境中对映异构体在降解速率、优势富集等方面的差异，从 而为评估污染物对公众健康的威胁和环境风险方面提供重要的实验依据。 β-环糊精是由淀粉通过环糊精葡萄糖基转移酶降解制得的一类由 7 个葡萄糖基单元通 过 α-1，4-糖苷键联结而成的环状低聚糖。环糊精具有独特的内疏水、外亲水结构使其土 壤修复等领域显示出重要的应用价值。 实验选用了具有代表性的手性苯氧丙酸类除草剂(RS)-2,4-二氯苯氧丙酸甲酯（RS-2， 4-DP）（图 2）为研究对象，以 β-CD、CM-β-CD 及PM-β-CD 等四种 β-CDs做为 RS-2，4-DP 脂肪酶促水解的添加剂，探讨了 β-CD 及其衍生物对酶促反应的影响，并用光谱学方法解释 β-CDs 与 2，4-DP 的相互作用及机理。 2 实验方法 50mL 具塞锥形瓶中依次加入 15mL PH＝7.8 缓冲溶液、0.1mL500mg/L 2,4-DP 的甲醇储 备液和一定量的 β-CDs，在振荡器上 10min 混匀后，加入 5mL 脂肪酶溶液在 30 ±1℃下无 光照模式以 80rpm 速度恒温回旋振荡 5 小时。反应完成后，立即加入 1mL1:1(v/v)浓硫酸中 止反应。用 30ml 乙酸乙酯分三次萃取2 ，4-DP 。有机相加入无水硫酸钠干燥24 小时，真空 旋转蒸发仪上浓缩至近干。农药残留物用甲醇定容后转入 1.5mL 自动进样瓶供手性气相色 谱分析残留农药浓度及 ER 值。 3 结果与分析 3.1 β-CD 和改性 β-CD 对 2,4-DPM 酶促水解的影响 实验采用了三种 β-环糊精及其衍生物，它们是 β-环糊精、羧甲基化 β-环糊精和 部分甲基化 β-环糊精(依次分别简称为 β-CD 、CM-β-CD 和 PM-β-CD)。分别测试了 它们对 2,4-DPM 水解反应率的影响。 研究表明 CM-β-CD 对脂肪酶的水解活性有激活作用。在同样条件下，CM-β-CD 的加入使 2,4-DPM 的水解率从 31.8%提高到了 43.9% 。然而，PM-β-CD 对脂肪酶的 活性却有抑制作用，PM- β-CD 的加入使2,4-DPM 的水解率从 31.8% 下降到了 16.5%。 对 β-CD 来说，添加与否，对 2,4-DPM 的水解率没有影响。PM-β-CD 中甲基的引入 将引起 2,4-DPM 烷基部分的包结，因此减少了与水分子的接触机会，从而降低了脂 肪酶的对 2,4-DPM 的水解活性。相反的，CM-β-CD 的羧基将使环糊精与 2,4-DPM 之间形成氢键作用，这有助于形成环糊精-2,4-DPM 的包结物。这将导致 2,4-DPM 与 水的接触面积增大，因此脂肪酶水解 2,4-DPM 的活性也得到提高。 对脂肪酶的对映选择性来说，β-CD 和 CM-β-CD 对脂肪酶水解 2,4-DPM 的对映 选择性没有影响。PM- β-CD 的加入分别使脂肪酶的对映选择性从 1.30 下降到 1.12。 这一结果显示，PM- β-CD 可能优先与 2,4-DPM 的某一对映异构体形成包结物，因此 IV−37 第三届全国环境化学学术大会论文集 降低了脂肪酶水解包结状态的 2,4-DPM 的对映选择性。 3.2 β-CD 和改性β-CD 的加入量对脂肪酶活性的影响 在酶促水解过程中，环糊精及其衍生物的浓度也使影响酶活性的一个重要因素。 实验考察了不同浓度的环糊精及其衍生物对脂肪酶活性的影响。实验结果显示: