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益智康脑丸扶芳藤提取物对小鼠免疫功能的影响研究 肖艳芬，黄 燕，王 琳，王 坤，肖 健（广西中医学院微生物学与免疫学教研室，广西 南宁 530001）【摘 要】 目的 探讨扶芳藤提取物对小鼠免疫功能的影响。 方法 通过检测免疫抑制小鼠的脏器/体质量比值、巨噬细胞吞噬率、淋巴细胞转化率以及血清溶血素的变化，观察不同剂量水平的扶芳藤乙醇提取物对小鼠免疫功能的影响。 结果 中、高剂量的扶芳藤提取物可明显提高免疫抑制小鼠的脏器/体质量比值、巨噬细胞吞噬率、淋巴细胞转化率以及血清溶血素含量（P＜0.05）。 结论 扶芳藤提取物可以增强小鼠免疫功能。 【关键词】 卫矛科； 植物提取物； 扶芳藤； 免疫系统/药物作用； 小鼠 文章编号： 1009-5519（2012）12-1768-02 中图法分类号： R967 文献标识码： 扶芳藤[Euonymus fortunei（Turcz.）Hand.-Mazz.]属卫矛科卫矛属植物，又名换骨筋、小藤仲，《本草拾遗》称扶芳藤能“主一切血，一切气，一切冷，去百病。久服延年，变白，不老……”[1]。 前期研究表明复方扶芳藤合剂具有抗疲劳、增强免疫功能的作用[2-3]，但是扶芳藤作为复方扶芳藤合剂方中的君药，目前对其药理学与免疫学作用机制知之甚少。本研究通过建立环磷酰胺（cyclophos-phamide，Cy）所致免疫抑制小鼠模型 ，利用扶芳藤提取物 （extractof euonymus fortunei）进行干预，探讨扶芳藤对小鼠免疫功能的作用机制，为临床应用扶芳藤提供进一步的实验依据。 1 材料与方法 1.1 药物的制备 取扶芳藤 1 kg，加入相当于药材 10 倍量的水，在不锈钢锅内煮开后1 h，过滤，保留滤液 ；药渣再加 8 倍于生药量的水，煮开后文火煎30 min，过滤去渣 ，合并两次滤液 ，浓缩至相当于原生药量的容量即1 000 mL 时 ，取出冷却 ；然后加入 95%食用乙醇，边加边搅拌，直至药液中含乙醇为80%时，放置 48 h，在24 h 内搅拌 3～4 次后，静置 24 h，过滤去渣 ，滤液在旋转回收器中回收乙醇至无醇时，将无醇的液体加热，浓缩成每毫升2.0 g生药的药物，保留于4 ℃冰箱，使用时再用双蒸水稀释成所需浓度[4]。此外，本实验所用Cy 购自江苏恒瑞医药股份有限公司 ，批准文号：国药准字ConA 为美国 Sigma 公司产品 ，用磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2）配制至100 μg/mL，置-20 ℃冰 箱保存备用；红细胞裂解液购自上海博蕴生物科技有限公司；2%、10%绵羊红细胞（SRBC）、10%鸡红细胞以及新鲜豚鼠血清由本教研室自备。 1.2 方法 取健康昆明种小鼠 50 只，雌雄各半，6 周龄，体质量18～22 g，由广西医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK 桂2008－0003。将所有小鼠随机分为 5 组：（1）实验组（扶芳藤提取物加Cy）；（2）对照组（Cy）；（3）空白组（生理盐水）。其中实验组包括高、中、低3 个剂量组（高剂量组 200 mg/kg、中剂量组 100 mg/kg，低剂量组50 mg/kg）。各组小鼠分笼饲养 ，自由进食 ，喂标准颗粒 饲料，饮纯净水。本研究采用Cy制造免疫抑制小鼠模型 ：Cy按 40mg/kg 给实验组与对照组小鼠腹腔注射 ，每天 1 次 ，共 3 d。实验组同时给予扶芳藤提取物灌胃，按相应剂量给药，每天1 次 ，共15 d；对照组给予生理盐水腹腔注射。另外再取昆明种小鼠 50 只，按上述方法分组并用药，用于血清溶血素测定试验。 1.2.1 脏器/体质量比值测定 脱颈椎处死小鼠，称量体质量，再分离胸腺、脾脏，称质量后分别计算脏器指数。以脏器质量（mg）/体质量（10 g）作为脾脏和胸腺指数。 1.2.2 腹腔巨噬细胞吞噬功能测定 实验结束前 1 d，腹腔注射淀粉溶液2 mL 作为诱导剂 ；实验结束前 1 h，腹腔注射 10%鸡红细胞0.2 mL，处死小鼠后用 PBS 液 2 mL 洗出腹腔巨噬细胞 ，将洗出液置于载玻片上，30 min后洗涤，固定，行姬姆萨染色，油镜下每张片计100 个巨噬细胞 ，并计吞噬鸡红细胞的细胞数 ，吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100 个巨噬细胞×100%。 1.2.3 淋巴细胞转化试验 取小鼠脾脏置于 2 mL RPMI1640 培养液中研磨，过200 目细胞筛，1 000 r/min 离心 10 min 后，弃上清液，用红细胞裂解液2 mL 重悬后反应 7 min，1 000 r/min离心10 min，用RPMI1640 培养液重悬细胞，配置成 5×106mL-1细胞悬液。取96 孔细胞培养板，按每 100 μL 培养基 5×105个