家族性低钾型周期性麻痹家系的基因分析.pdfVIP

一 3O6 一 文章编号 ：1007—4287 2015 02—0306—04 家族性低钾型周期性麻痹家系的基因分析 ’ 元红花，高 宇，金银 实，南光 贤 吉林大学 中 日联谊医院 神经 内二科，吉林 长春 130033 家族性低钾型周期性麻痹 hypokalemicperi— 现无力的发作 。此外，该 电流的长期作用使肌细胞 odieparalysis，HPP 是常染色体 显性遗传性肌 肉 内钠离子持续超载 ，产生细胞毒性 ，即使在发作 问 病 ，是一种以发作性 的迟缓性瘫痪伴血钾水平 降低 期，患者细胞也可 能存在水肿和变性[7,83。本文对 为特征的骨骼肌离子通道病n]。肌无力经常累及 四 一 家族性低钾型周期性麻痹家系通过遗传基因分析 肢 ，严重者可死于呼吸肌麻痹或血清钾降低所致 的 的方法，探讨有无基因突变位点，以进一步明确病因 心律失常 ]。涉及 的基 因有 CACNA1S基 因和 并指导治疗 。 SCN4A基因。有近 9O 的患者被发现在上述基 因 1 资料与方法 编码骨骼肌离子通道 电压感受器 S4片段的外显子 1．1 病例资料 上存在导致精氨酸替换 的点突变 ]。通常 由精神紧 目标家系同一代 中的6名成员，I代夫妻二人 张、寒冷、感染 、输入葡萄糖溶液 、体温下降、代谢性 均正常，无低钾型周期性麻痹病史。 Ⅱ代 中6人有 碱 中毒 、麻醉以及应用类固醇药物等诱发 ，给予补钾 3人患有低钾型周期性麻痹 ，均为男性 。其下一代 治疗后症状可基本消失 。家族性低钾型周期性麻痹 未见有低钾性周期性麻痹病例发生。该家族 中患病 的发病机制 尚不明确，目前认为由上述两基因突变 者 3人发病形式基本相 同，发病年龄基本在 2O一4O 导致的精氨酸替换而产生的 “门控漏 电流”为致病的 岁之间，均在劳累或体育锻炼后发病 ，主要累及四肢 关键_6]。该电流的持续存在导致骨骼肌细胞膜静息 肌肉，发病前后无肌 肉疼痛，未发现 明显心 电图异 电位稳态改变 ，在导致血钾降低 的诱 因的存在下，出 常 ，补钾后症状很快消失。 II 6 1．2 研究对象 min，其 间颠倒 混匀数次。④ 加入 400肚lLysis 同一代中的6名成员，其 6人 中3人患有低钾 BufferB，颠倒混匀数次。⑤离心 5min，将上清转 型周期性麻痹 ，均为男性 。 入离心柱 ，静置 2min，离心 1min，去废液 。⑥使用 1．3 基因检测 washBufferA洗涤一次 ，WashBufferB洗两次 ，晾 1．3．1 全血基因组提取 ①取 200肚l血液 ，加入 干乙醇。⑦加入 100 1双蒸水 ，静置 5min，12000 900 l1×STMT颠倒混匀 ，静置 5min，12000rpm rpm 离心 2min洗脱 ，管底即为基 因组 。 离心 2min，小心去上清。重复一次 。②加入 450 l 1．3．2 引物合成 根据 CACNA1S外显子 11、30 LysisBufferA，震荡，使之分散开 。③6O℃水浴 30 和 SCN4A外显子 12序列 的上下游 内含子序列设 计如下引物 ： *通讯作者 目实验诊断学 2015年 2月 第 19卷 第 2期 307 反 应 C ℃ ℃ ℃ C 序醇 ∞∞∞∞ 皇， ～ ．一 引物合成后 ，12，000g，1min离心 ，用灭菌双蒸 图 1。 水溶解引物至终浓度 10tLM。 循 M 1 2 3 4 5 6 1．3．3 PCR扩增基 因 反应体系 ： 组成 2×TaqPCR m iX F I：游引物 10／LM R下游引物 10JM 组模 板 H M：I 12000从小到大 100l1p、25~1bp、 bp、75 ／bp、lkb、2kI] 1．j 5l【察者 1；2．观察糟 2；3．观察 抒 1．观察并 1·；5．观察糟 5； j．观察嚣 图 1 电泳检测结果 2．2 PCR扩增 见图 2—4。 1．3．4 PCR产物纯化 ①将剩余样 品点样在 回收 3 4 5 6 胶 巾．从琼脂糖凝胶 巾把 目的条带切下，加入到灭菌 离心管中．进行称重 ；②在胶块 中加入相 当于 3倍凝 胶体积的溶胶液 A，于 5OC水浴中放置 10min，在 水浴期间不断将 离心管缓慢 下颠倒 ，一直到完全 溶解：③将之fj 得『到 的溶液加入到一个 吸附柱 CA2。 进彳亍13000rpm离心 3OS，丢弃废液；①再向吸附柱 加入漂洗液 PW700肚l，再进行 13000rpm 离心 30s．丢弃废液；⑤继续加入漂洗液PW500 I。给予 13 M ：D12000从小到 人 10